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719600567鐵蟲 (初入文壇)
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[求助]
求助關(guān)于WB重復性差的問題。 已有2人參與
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我跑sd大鼠胰腺組織的yap及p-yap蛋白（65-78kd）的wb已經(jīng)有好幾個月了，期間偶爾跑出過一兩次，但是重復性很差，經(jīng)常是空白條帶或者是一片灰。 關(guān)于我跑wb的一些細節(jié)。 1.用的是10%的膠，上樣量是20微； 2.nc膜，轉(zhuǎn)膜條件100v，100min，轉(zhuǎn)膜后麗春紅染色可以看見條帶； 3.5%脫脂牛奶室溫封閉1.5-2h； 4.一抗用的是cst的抗體按說明書配的1:1000，4攝氏度孵育過夜； 5.tbst洗5min*3次； 6.二抗用過1：1000和1：500的感覺差不多，該出不來還是出不來，確定種屬是沒有加錯的； 7.tbst10min*3次； 8.ecl反應三分鐘膠片曝光，壓過半小時也還是沒有，內(nèi)參是有的。 想發(fā)圖，但是這個論壇真的很難用誒？！ |
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719600567
鐵蟲 (初入文壇)
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- 蟲號: 27491323
- 注冊: 2021-10-09
- 專業(yè): 胰腺外分泌功能異常與胰腺
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1:1000比1:5000濃度要高吧，但就算是這樣也曝不出來；20微應該很夠了吧，再怎么說也不應該什么都沒有；因為是cst的抗體，所以還是很信任的，這個建議有待嘗試，謝謝。 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
3樓2022-01-19 07:50:42
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