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happygjx木蟲 (小有名氣)
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[求助]
酵母雙雜交篩庫(kù)問題 已有1人參與
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我篩了兩次cDNA文庫(kù)，誘餌和文庫(kù)菌雜交完涂DDO/X－a-gal／AbA的150mm的大板子，第一次為了省點(diǎn)板子，菌液用3ml 0.5xYPDA重懸雜交菌沉淀，沒有進(jìn)行稀釋，直接涂了20個(gè)大板每個(gè)200ul，一周過去了啥也看不出來(lái)。感覺很濃，背景一片灰，有的一片藍(lán)，沒法挑單克隆啊。 第二次做按著說明書用10ml 0.5xYPDA重懸雜交菌沉淀，涂了60個(gè)大板每個(gè)200ul， 第三天還是啥也看不出來(lái)，感覺還是很濃。而10倍稀釋后涂了DDO對(duì)照板子，第二天就能看出好多單菌落。 有沒有大佬做過，求指教。是這個(gè)篩選策略有問題還是涂得問題��？要稀釋多少倍涂嗎？ |
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2樓2021-10-11 09:17:23
宇智波斑5547
新蟲 (著名寫手)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
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- 帖子: 1483
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- 蟲號(hào): 4178690
- 注冊(cè): 2015-10-27
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- 專業(yè): 細(xì)胞衰老
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互作太強(qiáng)，菌液太多了。建議整個(gè)使用過程中都用四缺加藥培養(yǎng)基，即始終以最嚴(yán)苛的條件進(jìn)行篩選。 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
3樓2022-01-04 09:31:41
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