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| 【懸賞金幣】回答本帖問(wèn)題，作者473212012將贈(zèng)送您 6 個(gè)金幣 | |||
473212012新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
異源表達(dá)抗菌蛋白
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通過(guò)雙酶切，T4酶連的方式，將我的1300多bp的目的片段連上了pet-28a，構(gòu)建大腸桿菌（BL21）構(gòu)建重組菌，異源表達(dá)大概45kda的抗菌蛋白，然后去跑sds-page發(fā)現(xiàn)雜帶很少，過(guò)鎳柱也發(fā)現(xiàn)流穿前的破碎上清，蠻干凈的，而且用低濃度20，40，60到400的咪?去洗脫，沒(méi)能洗下來(lái)，還有一個(gè)現(xiàn)象就是種子液加1%到液體發(fā)酵，發(fā)現(xiàn)大腸桿菌長(zhǎng)得很慢，3小時(shí)了菌液都不是很混濁，OD600測(cè)了一下在0.2～0.3，就感覺(jué)被抑制了。大家是否有碰到這樣的現(xiàn)象呢，幫幫我吧，糾結(jié)兩三個(gè)月了！圖中從第2泳道起分別是流穿，20，40，60，80，100，200，400梯度洗脫。 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
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