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潘小陽(yáng)陽(yáng)陽(yáng)新蟲 (初入文壇)
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[求助]
同源重組遇到的問(wèn)題求助！ 已有2人參與
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同源重組后，菌落長(zhǎng)得不多，但是陽(yáng)檢全部正確，一排條帶都對(duì)。但是送測(cè)之后要不顯示未長(zhǎng)菌要不就顯示沒(méi)連上，好幾次了都這樣，孩子心態(tài)真的崩了。各位哥哥姐姐求助sos！ 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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myxmyhh
銀蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
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- 蟲號(hào): 3285358
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- 性別: GG
- 專業(yè): 植物生理與生化
【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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同源重組效率會(huì)很高，一般成功重組上都是滿板菌，這里考慮你PCR鑒定的引物不合適導(dǎo)致出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果，而實(shí)際上并沒(méi)有重組上。 跟樓上建議一樣，采用Insert F 加上 Vector R 來(lái)進(jìn)行菌落PCR。 另外，同源重組失敗可以考慮同源臂GC含量的問(wèn)題，建議檢查一下自己的引物，如果引物沒(méi)有問(wèn)題則需要更換擴(kuò)增Insert的模板。 最后，你同源重組失敗但是長(zhǎng)菌說(shuō)明Vector并沒(méi)有酶切干凈，可以考慮加長(zhǎng)酶切時(shí)間。 |
3樓2021-08-26 17:30:11
pennchem
專家顧問(wèn) (正式寫手)
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專家經(jīng)驗(yàn): +21 - MolEPI: 1
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- 注冊(cè): 2012-11-21
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
- 管轄: 生物科學(xué)
2樓2021-08-25 12:08:42
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