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北京艾柏森鐵蟲 (小有名氣)
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[交流]
如何利用多色流式細(xì)胞術(shù)篩選抗體分泌B細(xì)胞
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B細(xì)胞對(duì)抗原的免疫應(yīng)答有兩種情況：一種是胸腺非依賴性抗原（thymus-independent antigen，TI抗原），大多為多糖類和脂類抗原，不需要T細(xì)胞的輔助，就可直接激活B細(xì)胞產(chǎn)生IgM類抗體，主要由B1細(xì)胞介導(dǎo)，其抗原受體多樣性有限，特異性差；另一種是胸腺依賴性抗原（thymus-dependent antigen，TD抗原），為蛋白類抗原，主要由B2細(xì)胞介導(dǎo)，激活B細(xì)胞發(fā)生免疫應(yīng)答需要T細(xì)胞的輔助，其間會(huì)經(jīng)歷抗體親和力成熟、類別轉(zhuǎn)換和記憶B細(xì)胞形成等過程。 所以在B細(xì)胞的分化過程主要可分為前B細(xì)胞（Pre-B cell）、不成熟B細(xì)胞(immature B cell)、成熟B細(xì)胞(mature B cell)、活化B細(xì)胞(activated B cell)和漿細(xì)胞(plasma cell)五個(gè)階段。其中前B細(xì)胞和不成熟B細(xì)胞的分化是胸腺非依賴性的，其分化過程在骨髓中進(jìn)行。胸腺依賴階段是指成熟B細(xì)胞在抗原刺激后活化，在抗原提呈細(xì)胞和Th細(xì)胞的輔助下成為活化B細(xì)胞，進(jìn)而分化為合成和分泌抗體的漿細(xì)胞，這個(gè)階段的分化主要是在外周免疫器官中進(jìn)行的。 B細(xì)胞分化的各個(gè)階段可以通過評(píng)估不同的細(xì)胞表面標(biāo)志物的表達(dá)和水平來確定，這些標(biāo)志物的表達(dá)和水平在B細(xì)胞分化的整個(gè)過程中都受到調(diào)節(jié)。前B細(xì)胞胞漿中可檢測到IgM的重鏈u鏈，但無輕鏈，也無膜表面Ig的表達(dá)，因此缺乏對(duì)抗原的反應(yīng)能力。末端脫氧核甘酸轉(zhuǎn)移酶（terminal deoxy nucleotidyl transferase TdT）以及CD10可表達(dá)在前B細(xì)胞，進(jìn)入非成熟B細(xì)胞后這兩種標(biāo)志即消失，因此TdT和CD10對(duì)于區(qū)分前B細(xì)胞與B細(xì)胞其它發(fā)育階段非常有用。CD19、CD20和MHCI類抗原在此階段開始表達(dá)。前B細(xì)胞對(duì)抗原無應(yīng)答能力；不成熟B細(xì)胞開始表達(dá)mIgM，但如與抗原結(jié)合，則產(chǎn)生負(fù)應(yīng)答，使B細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)槭芤种茽顟B(tài)，不能繼續(xù)分化為成熟的B細(xì)胞，這是形成自身免疫耐受的機(jī)制之一，CD19、CD20和MHCI類抗原表達(dá)量增加，并可開始表達(dá)CD21抗原；骨髓中發(fā)育成熟B細(xì)胞經(jīng)血液遷移至外周淋巴器官，此時(shí)膜表面同時(shí)表達(dá)mIgM和mIgD，mIgD的表達(dá)防止了B細(xì)胞與抗原結(jié)合后所引起的免疫耐受；成熟B細(xì)胞接受抗原刺激后，在抗原提呈細(xì)胞和Th細(xì)胞的輔助下成為活化B細(xì)胞，進(jìn)而分化為漿細(xì)胞，合成和分泌各類免疫球蛋白，同時(shí)獲得了PC-1等漿細(xì)胞特異性標(biāo)志，而mIg，MHCI類抗原、CD19、CD20、CD21等標(biāo)記消失。 由此可知，B細(xì)胞及其分化亞群可以根據(jù)細(xì)胞表面表達(dá)的不同標(biāo)志物而區(qū)分。選擇這些結(jié)合了熒光的抗體直接標(biāo)記這些標(biāo)志物之后，就可以通過多色流式分析技術(shù)實(shí)現(xiàn)對(duì)抗體分泌B細(xì)胞的篩選。 |
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