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pinkzou新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
想用biobrick（生物磚）快速構(gòu)建多拷貝，但構(gòu)不出來(lái) 已有1人參與
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我先在載體的目的基因的表達(dá)框上游加入了EcoR1、Xbal1位點(diǎn)，在下游加入了Spe1和Pst1位點(diǎn)，然后構(gòu)建了與含目的基因載體不同抗性的含EcoR1、Xbal1、Spe1和Pst1的空載體，選用biobrick的原因是不能做膠回收，因?yàn)槟康幕蚺c載體的其他部分片段大小相似，做不了膠回收，然后又想快速構(gòu)建多拷貝質(zhì)粒。。。。。但是嘗試了很多次，無(wú)法用biobrick構(gòu)建。以下是我的具體步驟，請(qǐng)大佬們看看我做的是不是有問(wèn)題。首先用PCR擴(kuò)增與目的基因載體不同抗性的載體將其稱為B（含目的基因的載體稱為A）然后將B的PCR產(chǎn)物做膠回收，然后用EcoE1和Pst1對(duì)膠回收產(chǎn)物酶切，用EcoR1和Spe1對(duì)A酶切，同時(shí)再配一個(gè)體系用Xbal1和Pst1對(duì)A酶切，然后再將三個(gè)酶切產(chǎn)物進(jìn)行連接轉(zhuǎn)化，但是始終不能得到目的菌株。A載體和B載體如圖所示。新人，沒(méi)啥金幣，實(shí)在對(duì)不住啊 A B |
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lixinlihu
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2樓2021-07-31 20:10:16
pinkzou
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3樓2021-09-23 13:27:10
4樓2022-05-13 13:13:16
啊哈哈i
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5樓2022-07-22 10:25:22
啊哈哈i
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請(qǐng)教一下，我覺(jué)得你這樣只能得到一個(gè)單拷貝的載體，用Xbal1和Pst1酶切的片段是怎么連上呢載體的呢？ 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
6樓2022-07-22 10:27:37
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