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| 【懸賞金幣】回答本帖問(wèn)題，作者是火龍果呀將贈(zèng)送您 5 個(gè)金幣 | |||
是火龍果呀新蟲 (初入文壇)
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[求助]
重組質(zhì)粒挑取單克隆后菌液pcr沒有條帶，求助大神可能是什么原因，如何排查
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我在基因沉默， 在公司基因合成( PUC57+目的基因)后，我們自己做重組載體( TRV2+目的基因)，雙酶切膠回收然后連接轉(zhuǎn)化，這兩天在涂平板(50mg/ L Kana+ LB)挑取單克隆，搖菌后菌液pcr，前面的過(guò)程都比較順利，但是菌液pcr就是跑不出條帶，一個(gè)模糊的條帶都沒有，求助各位大神是哪里出了問(wèn)題，如果是空載自連的話，我挑的12個(gè)菌都沒有條帶，而且我連接目的基因與載體的摩爾比是10：1，感覺不太可能。 菌液pcr的酶用的擎科的colony，引物是目的基因的引物，求各位大神指點(diǎn) @biostar2009 @飛約瘋?cè)嗽?/u> @wizardfan @youlinglyw 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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ken19860823
木蟲 (正式寫手)
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- 專業(yè): 免疫生物學(xué)
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提取一個(gè)plasmid去測(cè)序的同時(shí)調(diào)整下連接比例.順帶檢查下載體片段濃度.陽(yáng)性對(duì)照是必須的，可以幫助你排除操作與試劑過(guò)期問(wèn)題 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
2樓2021-07-30 09:58:08
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