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| 【懸賞金幣】回答本帖問(wèn)題，作者小魚(yú)的媽將贈(zèng)送您 15 個(gè)金幣 | |||
小魚(yú)的媽鐵蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
基因克隆進(jìn)載體在表達(dá)時(shí)可能出現(xiàn)移碼，這種情況怎么避免？
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 最近在做抗體蛋白的真核表達(dá)，準(zhǔn)備拿pcDNA3.1/His A來(lái)做真核表達(dá)載體，該載體圖譜的酶切位點(diǎn)已上傳。準(zhǔn)備將Fc段基因克隆至Not I（GCGGCCGC） 和 Xba I (TCTAGA)之間，但是根據(jù)圖譜的堿基來(lái)看,在Not I的最后兩堿基(GC)后會(huì)存在缺少一個(gè)堿基組成三聯(lián)密碼子，因此我在設(shè)計(jì)引物PCR擴(kuò)增Fc段酶切位點(diǎn)有意地在Not I后面（即Fc段之前)加入了一個(gè)堿基“T”，后面的Xba I 同上，這樣的話相當(dāng)于對(duì)Fc段基因做了改造，但是可以避免蛋白表達(dá)時(shí)出現(xiàn)移碼，請(qǐng)問(wèn)各位，這種增添堿基的方法有什么缺陷嗎？ pcDNA3.1HIS.png |
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YU_DG
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2樓2021-07-29 14:53:55
ken19860823
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有點(diǎn)多余的步驟 翻譯的時(shí)候識(shí)別的是atg，atg之前一般加個(gè)gccacc幫助核糖體進(jìn)入.atg之后別亂碼就行，載體構(gòu)建測(cè)序是金標(biāo)準(zhǔn)，ok了才能下一步 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
3樓2021-07-30 09:47:31
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