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LS-Cui新蟲(chóng) (初入文壇)
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[交流]
做快速核酸檢測(cè)需要知道的那些技術(shù)（五）
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今天繼續(xù)分享關(guān)于重組酶和聚合酶等溫檢測(cè)的引物探針及實(shí)驗(yàn)過(guò)程中需要注意的事項(xiàng)等。 1、重組酶和聚合酶等溫檢測(cè)基礎(chǔ)跑膠反應(yīng)單元在用酚氯仿抽提后，離心后上清很少，白色層很多，怎么解決？ 遇到這種情況，把反應(yīng)單元重新充分混勻、離心即可。 2、引物探針軟件，我們用肉眼。用Amplifx評(píng)估，評(píng)估探針與上下游引物之間的二聚體情況，還有自身是否會(huì)形成二聚體之類的。 如果二聚體沒(méi)有問(wèn)題，就在距離3,端15個(gè)堿基的地方用THF替換一個(gè)堿基，然后5，端標(biāo)記FAM，3,端封閉；下游引物5,端，標(biāo)記生物素。 HF替換堿基有要求，沒(méi)有替換一個(gè)。 3、重組酶和聚合酶等溫檢測(cè)曲線是x的y次方，不是PCR的2的n次方曲線 S曲線和引物有關(guān)系，好的引物濃度越好大概率有S。引物越好，靈敏度越高 4.關(guān)于管材問(wèn)題 一般分為頂部采光和底部采光；一般來(lái)說(shuō)PCR儀器都是頂部采光需要蓋子透明；底部需要管身透明。不能全透明，全透明反射光弱，采集到的光就弱，靈敏度就會(huì)下降。 |
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