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LS-Cui新蟲 (初入文壇)
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[交流]
做快速核酸檢測需要知道的那些技術(shù)（四）
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今天繼續(xù)分享關(guān)于重組酶和聚合酶等溫檢測的擴增產(chǎn)物及實驗過程中需要注意的事項等。 1、重組酶和聚合酶等溫檢測的擴增產(chǎn)物是否可以進(jìn)行測序? 可以�？梢允褂弥亟M酶和聚合酶等溫檢測基礎(chǔ)試劑盒，擴增產(chǎn)物可以經(jīng)純化后進(jìn)行直接測序。 不可以�？梢允褂弥亟M酶和聚合酶等溫檢測熒光試劑盒，其擴增產(chǎn)物不可以進(jìn)行測序，這是因為在熒光試劑盒中使用了核酸外切酶，會對擴增產(chǎn)物進(jìn)行消化。 2、重組酶和聚合酶等溫檢測擴增產(chǎn)物跑膠前需要純化嗎？ 需要。重組酶和聚合酶等溫檢測反應(yīng)體系里的成分會干擾正常的瓊脂糖凝膠電泳，如果不進(jìn)行反應(yīng)產(chǎn)物回收，跑出來的可能是彌散條帶。 建議用Tris飽和酚和氯仿按1：1的比例進(jìn)行混合，或可以采用PCR產(chǎn)物純化試劑盒。 3、重組酶和聚合酶等溫檢測是否可以采用染料(染色劑)進(jìn)行檢測？ 可以。不過，就像 PCR一樣，這種染料通常可以結(jié)合到任何雙鏈 DNA上，因此引物干擾會產(chǎn)生假陽性信號。引物干擾在較低的溫度下會更嚴(yán)重一些，因此，不推薦將插入性染料用于這類試劑盒。 4、重組酶和聚合酶等溫檢測里的酶量可以調(diào)整嗎？ 如果是成品試劑盒，最好不要調(diào)整，重組酶和聚合酶等溫檢測反應(yīng)體系中的酶量是測試的最佳的濃度，一般情況下是不進(jìn)行調(diào)整的。 5、重組酶和聚合酶等溫檢測的反應(yīng)緩沖液可以多加或少加嗎？ 如果是成品試劑盒的話，反應(yīng)緩沖液的量是配套體系最佳的量，最好不要多加或少加。 6、重組酶和聚合酶等溫檢測反應(yīng)時需要反應(yīng)4分鐘之后拿出來混勻嗎？ 需要。如果擴增的模板濃度很高，可以省略該步驟，一般情況下，反應(yīng)4分鐘之后需拿出來進(jìn)行混勻離心，使反應(yīng)組分充分混合，達(dá)到最佳的效果。 |
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