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學(xué)員CSJmmu銅蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
PCR后電泳條帶很淺，換了引物、重新提取了核酸也還是這樣 已有2人參與
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| 原本是想做熒光定量PCR，但是有些基因能擴(kuò)增出來(lái)，有些不能，擴(kuò)增出來(lái)的循環(huán)數(shù)都很高，所以做了普通的PCR測(cè)試引物的情況，結(jié)果就是條帶非常淺。一開(kāi)始是懷疑引物有問(wèn)題，就從網(wǎng)上找了引物合成的詳細(xì)步驟一步一步的做，結(jié)果條帶還是很淺。所以想是不是模板有問(wèn)題，因?yàn)榫�蟲(chóng)體壁裂解總是不徹底，所以這次直接提取了RNA，逆轉(zhuǎn)錄之后又跑了PCR，跑膠之前測(cè)了A260/280和A260/230，分別是1.807和2.331 。跑膠的結(jié)果還是非常淺的條帶，但是marker是過(guò)曝的。不是有拖尾那種淺，看起來(lái)很干凈，沒(méi)有拖尾，就在最后有一條很淺的干凈的條帶。marker用的是DL2000的，產(chǎn)物的大小本來(lái)也該在最下面�，F(xiàn)在懷疑是引物二聚體。但是換了這么多對(duì)引物，如果一直有引物二聚體，那是哪里的問(wèn)題呢？求助大家，謝謝～ |
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zzsa
新蟲(chóng) (初入文壇)
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5樓2022-06-29 09:32:27
2樓2021-05-15 14:22:20
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3樓2021-12-20 11:56:51
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4樓2021-12-31 14:09:29
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