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2000bp的堿基缺失后還能回復(fù)突變嗎?
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最近遇到了一怪事: 敲除了某細菌的一個ORF菌落PCR檢測和DNA測序證明是正確的敲除菌株，當(dāng)將正確的單菌落接至LB中培養(yǎng)后進行菌液PCR檢測發(fā)現(xiàn)有微弱的條帶和陽對(出發(fā)菌株)一樣。開始懷疑是敲除菌株里混有未敲除菌株，所以對剛檢測過的菌液再進行平板劃線、挑單。再進行菌落PCR檢測，發(fā)現(xiàn)了好多單菌落都P出了微弱的條帶和陽對一樣，挑沒有出現(xiàn)和陽對一樣DNA條帶的單菌落再接至LB中培養(yǎng)，再進行菌液PCR檢測，又P出了微弱的DNA條帶和陽對一樣! 如果說是敲除菌株中混有沒敲除的菌株，那在我反復(fù)分單的情況下肯定會得到純的敲除菌株。然而事實是我連續(xù)分單了2次后分別進行菌落PCR和菌液PCR檢測，菌落PCR檢測是正確的敲除菌株，相同的菌落在LB液體里生長后在菌液PCR檢測就會發(fā)現(xiàn)它不完全是正確的敲除菌株。 你們有碰到相似情況嗎?我可以將這種現(xiàn)象歸結(jié)為敲除菌株的回復(fù)突變嗎?我知道一兩個堿基突變后可以發(fā)生回復(fù)突變，2000bp的堿基缺失后還能回復(fù)突變嗎? 之前有看到蟲友發(fā)了類似的帖子，不知道現(xiàn)在解決了嗎，歡迎回帖啊  |
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qfw_68: 博學(xué)EPI+1, 積極應(yīng)助獎勵！ 2021-05-25 15:42:39
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有沒有可能是非特異性條帶？可以重新設(shè)計被敲除片段內(nèi)部的引物進行PCR驗證，或者把該條帶回收測序驗證 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2021-05-10 20:31:37
3樓2021-05-12 15:48:49
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4樓2021-05-24 12:36:56
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5樓2023-05-31 23:13:16
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