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電子顯微鏡新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
質(zhì)粒手提求助 已有1人參與
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最近一直都在做質(zhì)粒擴(kuò)增提取，用的是堿裂解法，但是跑電泳都沒(méi)有條帶，完全空的那種。具體操作是先離心獲得菌體沉淀，然后加250μl p1，250μl p2，350μl p3，13000rpm離心10min，往上清中加異丙醇后冰浴10min，再離心，最后用70%乙醇清洗，加20μl水后跑電泳檢測(cè)。麻煩各位大佬幫忙看看，哪一步出現(xiàn)了問(wèn)題？謝謝? 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶(hù)端 |
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sannny
新蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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2樓2021-05-09 15:11:56
tjj451679479
新蟲(chóng) (小有名氣)
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
| 首先，能買(mǎi)試劑盒就買(mǎi)個(gè)吧，國(guó)產(chǎn)的就行了，也不貴；其次如果是必須手提且確認(rèn)堿裂解過(guò)程可靠無(wú)誤的話(huà)，請(qǐng)注意上清加入異丙醇之后會(huì)有質(zhì)粒析出，需輕輕顛倒或吹吸（別用槍頭用一次性滴管）混勻至析出肉眼不可見(jiàn)；最后，加入70%乙醇漂洗離心后EP管（最好1.5mL）底部會(huì)有析出沉淀，請(qǐng)用不褪色記號(hào)筆在EP管外表面圈出其位置，再在生物安全柜之類(lèi)的大風(fēng)力且潔凈的設(shè)備內(nèi)吹干至沉淀透明不可見(jiàn)，此后再用ddH2O復(fù)溶。 |
3樓2021-05-10 09:09:54
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