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清若123456新蟲 (小有名氣)
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[求助]
求助大神們，PCR引物C端如何加蛋白標(biāo)簽flag？
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急急急，求大神們救救急（。。。。。。。。。。。。。。。。湊字?jǐn)?shù)。。。。。。。。。。。。。。。。。前面的帖子以及刪了，怎么這個還提示 對不起，您已經(jīng)發(fā)過類似內(nèi)容的主題了，請不要一帖多發(fā)哦發(fā)不了） 老師讓我在引物（PCR引物）序列中引入蛋白標(biāo)簽flag，方便后續(xù)的純化。我的蛋白是分泌蛋白，我查到分泌蛋白一般建議把標(biāo)簽插在C端，求問大神們，我這樣設(shè)計對不對？ 上游引物F ：CCC（保護(hù)堿基）+ AAGCTT （酶切位點(diǎn)）+ KOZAK序列 +引物序列+GATTACAAGGATGACGACGATAAG（標(biāo)簽序列） 下游引物R：GC（保護(hù)堿基）+ GTCGAC（酶切位點(diǎn)） +引物序列 +CTTATCGTCGTCATCCTTGTAATC（flag標(biāo)簽序列反向互補(bǔ)） 我之前查的有人說說標(biāo)簽蛋白只需要加在上游引物就行，下游不用加？但那樣兩個的TM值不就差距很大了嗎？ |
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goblin7
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TM值我也走想過之前，一方面其實(shí)相差不會太大，他相比于你的目的基因影響不大的，另一方面，你實(shí)在擔(dān)心就在保護(hù)堿基上調(diào)整一下 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
7樓2021-04-02 20:11:27
snoopyzxx
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2樓2021-04-02 18:51:13
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3樓2021-04-02 18:52:15
goblin7
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4樓2021-04-02 20:08:22
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