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| 【懸賞金幣】回答本帖問題，作者sweet5210將贈送您 15 個金幣 | |||
sweet5210新蟲 (初入文壇)
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[求助]
相對定量還是絕對定量分不清楚，跪求問題，重賞�。�！ 已有2人參與
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跪求請問這段話描述的到底是相對定量pcr還是絕對定量pcr，在網(wǎng)上查了很多資料說相對的不需要標(biāo)曲，想像他一樣獲得細(xì)胞中mRNA的含量完全不知道什么意思，不做這個相關(guān)的，只想要這一小部分?jǐn)?shù)據(jù)，跪求回答，快畢業(yè)了好頭疼。 “通過測定 control RNA(在 Revert Aid First Strand c DNA合成試劑盒的人GAPDH m RNA)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，將Ct 值轉(zhuǎn)化成絕對GAPDH 拷貝數(shù)。 標(biāo)準(zhǔn)曲線通過配制不同濃度的control RNA通過同樣條件的逆轉(zhuǎn)錄和 q PCR定量得到。每個濃度均重復(fù)測定三次。通過計數(shù)的細(xì)胞個數(shù)，得到細(xì)胞內(nèi)平均的 GAPDH的拷貝數(shù)。細(xì)胞內(nèi)的mRNA ACTB 和 TK1 參照 GAPDH 表達(dá)量，通過 2–ΔΔCt方法計算得到” |
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yuehedou
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2樓2021-02-25 15:43:29
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3樓2021-02-26 17:48:41
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相對定量因為沒有做標(biāo)準(zhǔn)曲線，細(xì)胞內(nèi)基因的表達(dá)量mRNA ACTB 和 TK1 只能相互比較。在相對定量中，要么以ACTB的表達(dá)量為標(biāo)準(zhǔn)（一般默認(rèn)為1），TK1相對于ACTB的表達(dá)量為多少，要么以TK1的表達(dá)量為標(biāo)準(zhǔn)，ACTB的表達(dá)量為多少。 絕對定量因為有標(biāo)準(zhǔn)曲線，mRNA ACTB 和 TK1 都可以通過比較標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出表達(dá)量。即以標(biāo)準(zhǔn)曲線的表達(dá)量為標(biāo)準(zhǔn)，mRNA ACTB 和 TK1 的表達(dá)量為多少。 |
4樓2021-02-27 15:37:46
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