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youxistar金蟲 (小有名氣)
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[求助]
infusion克隆后菌落PCR送測序全部為載體序列
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使用infusion克隆，切膠回收得到片段為500bp+的位置，按說明轉(zhuǎn)入后進(jìn)行藍(lán)白斑篩選，涂抹平板后37℃過夜培養(yǎng)，過了13小時+，看沒有怎么長菌（而且居然還沒有藍(lán)色菌落�。谑沁^了18小時+再取出來，選取目測長的好的單菌落，用滅菌的牙簽蘸菌落，進(jìn)行PCR鑒定，將結(jié)果出現(xiàn)目的位置條帶的菌落送測序，5個測出了的序列，經(jīng)blast全部為載體的序列，崩潰了啊。求教可能的原因是什么呢？謝謝各位老師了。還有就是某個平板涂后培養(yǎng)，第二天看黏糊糊一片，這是什么情況呢？（涂抹80微升，用的一次性L型涂布棒，蔣菌液滴多處在平板上面后，像攤煎餅一樣攤轉(zhuǎn)一圈這樣涂的）。 QQ圖片20210202173253.jpg |
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你的菌太多了，都長糊了。你應(yīng)該藍(lán)白斑和抗性篩選同時做，平板也要加抗生素，這樣才能保證讓沒有轉(zhuǎn)化質(zhì)粒的菌不生長。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2021-02-02 20:12:33
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