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hanzz19新蟲 (初入文壇)
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[求助]
關(guān)于lncRNA 胞漿胞核分離，用于lncRNA定位分析
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我想通過胞漿胞核分離的方法用于lncRNA定位分析，在分離胞漿胞核這一步出現(xiàn)了問題。 主要實(shí)驗(yàn)步驟：1.收集細(xì)胞用PBS洗滌后加入800ul預(yù)冷的低滲裂解液(10mM hepes ,1.5mM Mgcl2 , 10mMKcl),冰上2分鐘 2.加入10%NP-40 35ul ,使得NP-40最終濃度為0.4%， 3. 反復(fù)顛倒離心，3000rpm, 7min 4. 取500ul上清做胞漿用于后續(xù)提RNA 5.沉淀用低滲裂解液(不含NP-40)洗滌3次， 6. 3000RPM,2MIN.去除上清，收集沉淀提胞核RNA。 遇到問題：1.胞核的ACTIN比胞漿亮很多，但胞漿U2和胞核U2都很亮沒有差異 胞核ACTIN比胞漿亮，考慮可能是裂解不好，細(xì)胞都沒裂解開，沉淀下去到胞核里了；但如果是這種考慮，胞漿和胞核U2不應(yīng)該一樣亮啊，我分析不出來原因了，求教大佬啊 2. 胞核的引物我選用了U2和U6 U2能P出來，U6卻不能P出來，這是為什么�。縐6和U2有什么區(qū)別？ |
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2樓2021-08-29 23:45:40
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