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堿裂解后內源性核酸酶會降解質粒嗎? 已有2人參與
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質粒穩(wěn)定性相關文獻中提到“The usual procedure to avoid pDNA degradation by endogenous bacterial nucleases is to go ahead promptly with alkaline lysis”,《分子克隆》中介紹堿裂解法時也提到“從細胞中釋放DNA,去除與DNA結合的蛋白質并快速使胞內核酸酶失活”。 以上資料都認為,堿裂解后需要避免內源性核酸酶對質粒的降解。而我的問題是,大腸桿菌中的質粒DNA不是會被甲基化修飾從而避免被內源性核酸酶降解嗎?因此,裂解后應該并不需要擔心質粒被內源性核酸酶降解啊,而且如果質粒會被內源性核酸酶降解,那么裂解之前在大腸桿菌體內豈不早就被降解光了么? 十分期待各位蟲友的指導解惑,謝謝! |
木蟲 (正式寫手)
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