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TAQ酶廠商是怎么確定酶活性的？ 已有1人參與
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有沒有廠商回答一下��？ 熒光定量PCR？定性PCR？ esy-023635429.jpg |
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2樓2020-08-26 15:23:42
wangyuan0929
金蟲 (小有名氣)
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
aliaa2019: 金幣+15, ★★★很有幫助, 確實(shí)是這樣，放射性和國(guó)內(nèi)熒光定量是兩個(gè)最主要的方案，不過有具體點(diǎn)的方案么？ 2020-08-27 07:58:43
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
aliaa2019: 金幣+15, ★★★很有幫助, 確實(shí)是這樣，放射性和國(guó)內(nèi)熒光定量是兩個(gè)最主要的方案，不過有具體點(diǎn)的方案么？ 2020-08-27 07:58:43
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https://www.douban.com/group/topic/151823150/ 大概思路是兩種 1. 用放射性同位素/熒光基團(tuán)標(biāo)記的試劑來進(jìn)行PCR，然后聚合結(jié)束后用電泳去除未用完的標(biāo)記物，最后通過放射性強(qiáng)度或熒光強(qiáng)度來得到聚合酶的反應(yīng)速度，從而計(jì)算酶活（U）。 2. 使用熒光染料插入雙鏈DNA的特性，在聚合過程中使用qPCR設(shè)備追蹤熒光強(qiáng)度變化曲線，從而推算酶促反應(yīng)速度，并計(jì)算酶活。 |
3樓2020-08-26 16:36:34
junjieshao
禁蟲 (小有名氣)
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4樓2020-08-26 21:50:21
5樓2020-08-27 07:59:28
wangyuan0929
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【答案】應(yīng)助回帖
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aliaa2019: 金幣+5, ★★★很有幫助, 好的，謝謝你，1μCi (α-32 P）不好操作 2020-08-27 12:36:36
aliaa2019: 金幣+5, ★★★很有幫助, 好的，謝謝你，1μCi (α-32 P）不好操作 2020-08-27 12:36:36
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sigma網(wǎng)站上有： https://www.sigmaaldrich.com/cat ... h®ion=CN Unit Definition 一個(gè)單位 Taq DNA 聚合酶定義為在上述試驗(yàn)條件下，+ 65°C 下 60 分鐘 內(nèi)將10nmol總脫氧核糖核苷三磷酸結(jié)合到酸可沉淀DNA中的酶量。 單位含量測(cè)定： 孵育緩沖液： 67 mM Tris/HCl；pH 8.3/25°C、5 mM MgCl 2 、10 mM 巰基乙醇、0.2% 聚乙醇、0.2 mg/mL 明膠、 dATP/dGTP/dTTP各0.2 mM 、以及 0.1 mM dCTP。 孵育程序： M13mp9ss、M13 引物 (17mer) 和 1μCi (α-32 P）dCTP 與 Taq DNA 聚合酶的適當(dāng)稀釋液在 50μl + 65℃ 孵育緩沖液孵育 60 分鐘。通過三氯乙酸沉淀測(cè)定摻入的 dNTP 的量。 體積活度：1 U/μl |
6樓2020-08-27 10:43:01
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