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NF-κB信號(hào)通路抑制劑活性篩選
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1. NF-kB信號(hào)通路介紹 NF-κB為一個(gè)轉(zhuǎn)錄因子蛋白家族，包括 Rel（c-Rel）、RELB、RelA/p65、NFκB1 p50/p105和NFκB2 p52/p100。這些蛋白起到二聚化轉(zhuǎn)錄因子的作用，可調(diào)節(jié)基因表達(dá)，并可影響到各種不同的生物學(xué)過程，包括先天和適應(yīng)性免疫、炎癥、應(yīng)激反應(yīng)、B細(xì)胞發(fā)育和淋巴器官形成。作為早期轉(zhuǎn)錄因子，NF-κB的激活不需要新翻譯出的蛋白進(jìn)行調(diào)控。因此，可以在第一時(shí)間對(duì)有害細(xì)胞的刺激做出反應(yīng)。NF-κB通路可被細(xì)胞應(yīng)激、炎癥細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子、紫外射線等激活。激活的NF-κB由胞質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)到胞核內(nèi)后與特定DNA序列結(jié)合，形成DNA/NF-κB復(fù)合物，啟動(dòng)下游DNA序列轉(zhuǎn)錄并合成蛋白，進(jìn)而發(fā)揮不同的生物學(xué)功能。 NF-κB信號(hào)通路在炎癥,腫瘤發(fā)生,發(fā)展中起著重要作用.許多腫瘤包括血液腫瘤和實(shí)體瘤中均發(fā)現(xiàn)NF-κB信號(hào)通路的持續(xù)激活. NF-κB信號(hào)通路激活可上調(diào)凋亡抑制蛋白Bcl-xL,XIAP,cIAP1,cIAP2和增殖相關(guān)蛋白cyclin D1等的表達(dá)從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖,抑制腫瘤細(xì)胞凋亡.由于NF-κB與腫瘤的密切關(guān)系,NF-κB抑制劑作為抗腫瘤候選藥物的研究具有巨大潛力. 2. 熒光素報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng) Luciferase報(bào)告基因系統(tǒng)是以熒光素(luciferin)為底物來檢測(cè)螢火蟲熒光素酶(fire fly luciferase)活性的一種報(bào)告系統(tǒng)。然后可以通過熒光測(cè)定儀也稱化學(xué)發(fā)光儀(luminometer)或液閃測(cè)定儀測(cè)定luciferin氧化過程中釋放的生物熒光。熒光素和熒光素酶這一生物發(fā)光體系，可以極其靈敏、高效地檢測(cè)基因的表達(dá)。是檢測(cè)轉(zhuǎn)錄因子與目的基因啟動(dòng)子區(qū)DNA相互作用的一種檢測(cè)方法。 3. NF-kB信號(hào)通路抑制劑活性篩選 NF-kB信號(hào)通路抑制劑活性篩選實(shí)驗(yàn)，是以NF-kB-Luc質(zhì)粒構(gòu)建報(bào)告基因細(xì)胞株，當(dāng)NF-KB通路被激活后，啟動(dòng)報(bào)告基因轉(zhuǎn)錄。本體系中通常用TNFa作為刺激劑誘導(dǎo)NF-KB通路激活，測(cè)試化合物對(duì)該通路的抑制活性。 NF-kB信號(hào)通路抑制劑.jpg |
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