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[交流]
NF-κB信號通路抑制劑活性篩選
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1. nf-kb信號通路介紹 nf-κb為一個轉(zhuǎn)錄因子蛋白家族，包括 rel（c-rel）、relb、rela/p65、nfκb1 p50/p105和nfκb2 p52/p100。這些蛋白起到二聚化轉(zhuǎn)錄因子的作用，可調(diào)節(jié)基因表達，并可影響到各種不同的生物學(xué)過程，包括先天和適應(yīng)性免疫、炎癥、應(yīng)激反應(yīng)、b細胞發(fā)育和淋巴器官形成。作為早期轉(zhuǎn)錄因子，nf-κb的激活不需要新翻譯出的蛋白進行調(diào)控。因此，可以在第一時間對有害細胞的刺激做出反應(yīng)。nf-κb通路可被細胞應(yīng)激、炎癥細胞因子、生長因子、紫外射線等激活。激活的nf-κb由胞質(zhì)轉(zhuǎn)運到胞核內(nèi)后與特定dna序列結(jié)合，形成dna/nf-κb復(fù)合物，啟動下游dna序列轉(zhuǎn)錄并合成蛋白，進而發(fā)揮不同的生物學(xué)功能。 nf-κb信號通路在炎癥,腫瘤發(fā)生,發(fā)展中起著重要作用.許多腫瘤包括血液腫瘤和實體瘤中均發(fā)現(xiàn)nf-κb信號通路的持續(xù)激活. nf-κb信號通路激活可上調(diào)凋亡抑制蛋白bcl-xl,xiap,ciap1,ciap2和增殖相關(guān)蛋白cyclin d1等的表達從而促進腫瘤細胞增殖,抑制腫瘤細胞凋亡.由于nf-κb與腫瘤的密切關(guān)系,nf-κb抑制劑作為抗腫瘤候選藥物的研究具有巨大潛力. 2. 熒光素報告基因檢測系統(tǒng) luciferase報告基因系統(tǒng)是以熒光素(luciferin)為底物來檢測螢火蟲熒光素酶(fire fly luciferase)活性的一種報告系統(tǒng)。然后可以通過熒光測定儀也稱化學(xué)發(fā)光儀(luminometer)或液閃測定儀測定luciferin氧化過程中釋放的生物熒光。熒光素和熒光素酶這一生物發(fā)光體系，可以極其靈敏、高效地檢測基因的表達。是檢測轉(zhuǎn)錄因子與目的基因啟動子區(qū)dna相互作用的一種檢測方法。 3. nf-kb信號通路抑制劑活性篩選 nf-kb信號通路抑制劑活性篩選實驗，是以nf-kb-luc質(zhì)粒構(gòu)建報告基因細胞株，當(dāng)nf-kb通路被激活后，啟動報告基因轉(zhuǎn)錄。本體系中通常用tnfa作為刺激劑誘導(dǎo)nf-kb通路激活，測試化合物對該通路的抑制活性。 nf-kb信號通路圖片.jpg |
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12樓2020-09-01 16:10:54
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