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My-life

捐助貴賓 (小有名氣)

[求助] QPCR的問題 已有1人參與

在做QPCR(sybr green)時一直沒有擴增曲線(就是一條直線),圖為溶解曲線的圖和程序參數(shù)。
擴增片段為cgc att cag gat tgc atg att gcc tcg tct taa cgg tct caa ctc gta(此片段為設計合成)
上下游引物為ttc agg att gca tga ttg cc和acg agt tga gac cgt taa gac g
20μL體積,1μL模板(10μM),1μL(10μM)上游引物和1μL(10μM)下游引物,10μL supermix液,8μL的純水。
所以在此向大神們請教幾個問題:1,單鏈模板可以直接PCR?
2,試劑盒supermix影響大?
3,影響QPCR的關鍵點是啥?
小白一枚,之前一直從事酶聯(lián)免疫的分析檢測,未涉及PCR實驗,初接觸,無處下手了。!

QPCR的問題
305889642721921794.jpg


QPCR的問題-1
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魔里紗

新蟲 (初入文壇)

可能是沒有設采集信號吧...

發(fā)自小木蟲IOS客戶端
2樓2020-07-11 21:55:57
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owl2010

金蟲 (正式寫手)

沒搞清楚你的模板是什么?如果模板是單鏈是不能擴增出片段的。做qPCR之前可以做常規(guī)PCR檢測一下是不是能擴增出條帶。沒有條帶說明引物不行或者模板不行。
男人的組成要素:金錢、面子、性、怕死、自戀、吹牛逼。
3樓2020-07-14 13:26:56
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匿名

用戶注銷 (小有名氣)


本帖僅樓主可見
4樓2020-07-14 14:58:18
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My-life

捐助貴賓 (小有名氣)

引用回帖:
3樓: Originally posted by owl2010 at 2020-07-14 13:26:56
沒搞清楚你的模板是什么?如果模板是單鏈是不能擴增出片段的。做qPCR之前可以做常規(guī)PCR檢測一下是不是能擴增出條帶。沒有條帶說明引物不行或者模板不行。

任何單鏈都無法擴增?
5樓2020-07-20 15:03:29
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A奇點

新蟲 (小有名氣)

引用回帖:
3樓: Originally posted by owl2010 at 2020-07-14 13:26:56
沒搞清楚你的模板是什么?如果模板是單鏈是不能擴增出片段的。做qPCR之前可以做常規(guī)PCR檢測一下是不是能擴增出條帶。沒有條帶說明引物不行或者模板不行。

如何做常規(guī)PCR。课业膓PCR做出來,內(nèi)參基因和目的基因的ct值都在31左右,太痛苦了

發(fā)自小木蟲Android客戶端
6樓2020-07-21 23:00:25
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duanbiao127

新蟲 (初入文壇)

【答案】應助回帖

單鏈可以擴增,cDNA都是單鏈,是可以擴增的,不要聽樓上的亂說。(關注生物技術控公眾號,有問題可留言)
7樓2020-08-12 10:57:28
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