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重組質(zhì)粒經(jīng)誘導(dǎo)劑表達(dá)后是不是就會(huì)持續(xù)表達(dá)？ 已有1人參與
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| 有一個(gè)基因缺失型工程菌，需要轉(zhuǎn)入外源基因表達(dá)，想問(wèn)下，質(zhì)粒成功轉(zhuǎn)進(jìn)去的菌株經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)后是不是就會(huì)持續(xù)表達(dá)。后面幾次培養(yǎng)不加誘導(dǎo)劑是不是也會(huì)生長(zhǎng)？ |
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4樓2020-07-11 07:33:35
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
神農(nóng)使者: 金幣+5, ★★★很有幫助 2020-07-12 01:27:53
神農(nóng)使者: 金幣+5, ★★★很有幫助 2020-07-12 01:27:53
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阿拉伯糖啟動(dòng)子的滲漏相對(duì)已經(jīng)很低了，滲漏是否足以支持菌株生長(zhǎng)，試一下就知道。另外，你后面培養(yǎng)不誘導(dǎo)也能生長(zhǎng)可能是你誘導(dǎo)的那個(gè)蛋白半衰期較長(zhǎng)，已經(jīng)表達(dá)的蛋白還能存在很長(zhǎng)時(shí)間，如果是這種情況，某些情況下會(huì)考慮在該蛋白后面加上降解標(biāo)簽。這都是我個(gè)人見(jiàn)解，僅供參考。 |
5樓2020-07-11 08:43:15
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2樓2020-07-10 14:34:10
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謝謝回復(fù)。我這邊就是質(zhì)粒轉(zhuǎn)進(jìn)去后，需要加阿拉伯糖誘導(dǎo)表達(dá)，然后菌種可以生長(zhǎng)，正常不加的話，基因不表達(dá)，菌種是不生長(zhǎng)的。剛轉(zhuǎn)進(jìn)去后，是只有加了誘導(dǎo)劑后才生長(zhǎng)，可后面培養(yǎng)了幾次發(fā)現(xiàn)不加阿拉伯糖也能生長(zhǎng)。就是疑問(wèn)是不是在誘導(dǎo)劑的板子上經(jīng)誘導(dǎo)后就能持續(xù)表達(dá)了。問(wèn)過(guò)一個(gè)師兄，他說(shuō)這種情況是提前誘導(dǎo)了，需要讓誘導(dǎo)消失，才能重新進(jìn)行后續(xù)的誘導(dǎo)表達(dá)實(shí)驗(yàn)，否則實(shí)驗(yàn)不準(zhǔn)確。就是不清楚怎么才能讓給誘導(dǎo)消失，還是最好重新轉(zhuǎn)化一次。 |
3樓2020-07-10 15:10:04
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6樓2020-07-12 01:29:38
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7樓2020-07-12 02:20:38
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8樓2020-07-12 09:06:18
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9樓2020-07-12 10:11:43
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我這個(gè)工程菌缺失的基因是代謝酶基因，這個(gè)菌株是在普通LB板子上不生長(zhǎng)，正常培養(yǎng)需要額外添加外源蛋白�，F(xiàn)在我是在做同源基因的原核表達(dá)，一是看目的基因表達(dá)后能否在正常板子上生長(zhǎng)，再一看是看表達(dá)量�，F(xiàn)在轉(zhuǎn)化后能生長(zhǎng)，但是表達(dá)量有點(diǎn)控制不住，感覺(jué)實(shí)驗(yàn)出問(wèn)題了 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
10樓2020-07-12 13:06:22
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