 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1446 | 回復(fù): 3 | ||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | ||
Anthony07新蟲 (初入文壇)
|
[求助]
【求助/交流】假單胞菌RED重組系統(tǒng)最后檢驗(yàn)PCR沒有條帶
|
|
 本人用RED重組系統(tǒng)敲除來(lái)敲除假單胞菌的某一基因，之前一直都能P出置換過(guò)的抗性條帶，自從疫情后，再次驗(yàn)證完全P不出條帶了。我重新開始制備，我的具體步驟是用pcm130擴(kuò)增出的抗四環(huán)素基因（上下游添加20bp的同源臂，之前是35bp，但是Tm值太大，縮減成20bp，之前也成功擴(kuò)出來(lái)了。），然后電轉(zhuǎn)化到帶有Pkd46的假單胞菌感受態(tài)（制備感受態(tài)前大搖用了L-阿拉伯糖誘導(dǎo)過(guò)，制備感受態(tài)用的是10%的甘油多次離心，全程4度制備），10ul的目的片段+100ul的感受態(tài)混勻冰浴30min后電轉(zhuǎn)，然后在加有氨芐和四環(huán)素的抗性LB平板上涂布（也加了L-阿拉伯糖）然后 隔夜培養(yǎng)也長(zhǎng)出了密密麻麻的單菌落，然后擴(kuò)大培養(yǎng)也能搖起來(lái)，然后做菌液PCR擴(kuò)增四環(huán)素抗性條帶（也提過(guò)基因組DNA去P，cDNA也試過(guò)），試過(guò)多次，只有引物二聚體，很懵逼，不知道哪里出錯(cuò)了。有木有大神給點(diǎn)建議，該如何整。都能在雙抗性的平板上長(zhǎng)出單菌落，卻沒辦法P出條帶，然后拿這個(gè)菌也擴(kuò)增不出16s，有考慮過(guò)是不是真菌污染，擴(kuò)增過(guò)18s，沒條帶，確認(rèn)沒有污染。請(qǐng)求大神幫忙，感激不盡！ |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有220人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
Anthony07
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 130.6
- 帖子: 44
- 在線: 6.6小時(shí)
- 蟲號(hào): 8048805
- 注冊(cè): 2018-02-19
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物生態(tài)學(xué)
3樓2020-06-08 22:35:08
slcat
新蟲 (著名寫手)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 25715.2
- 散金: 500
- 紅花: 1
- 帖子: 2596
- 在線: 12.1小時(shí)
- 蟲號(hào): 1741741
- 注冊(cè): 2012-04-07
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
|
按理說(shuō)不應(yīng)該擴(kuò)增不出16 S，有沒有考慮過(guò)是PCR的問(wèn)題？找個(gè)實(shí)驗(yàn)室的其他人幫你做一遍，PCR的材料都用他自己的 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2020-06-08 22:31:34
4樓2020-06-08 23:50:40
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 歡迎211本科同學(xué)，過(guò)A區(qū)國(guó)家線，A區(qū)非偏遠(yuǎn)一本，交叉學(xué)科課題組 +20 | lisimayy 2026-03-04 | 32/1600 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 274求調(diào)劑 +7 | cgyzqwn 2026-03-01 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 278求調(diào)劑 +5 | Gale1314 2026-03-06 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑推薦 +4 | 微辣不吃 2026-03-06 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +4 | 呼呼？~+123456 2026-03-05 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 303求調(diào)劑 +5 | forgman95 2026-03-05 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿211，0860總分286食品工程專業(yè)求調(diào)劑 +6 | 林林Winnie 2026-03-05 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 一志愿華中科技大學(xué)，化學(xué)專業(yè)344分，求調(diào)劑 +7 | 邢xing1 2026-03-02 | 7/350 |
|
|
|
[考博] 26申博-目前4篇SCI一作 +4 | chen_2024 2026-03-02 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 085701環(huán)境工程 求調(diào)劑 +7 | xiiiia 2026-03-04 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 267調(diào)劑求助 +5 | 聰少OZ 2026-03-04 | 5/250 |
|
|
|
[論文投稿]
 主編終審卡者不動(dòng)
 100+4
|
Stray2021 2026-03-03 | 4/200 |
|
|
|
[考研]
0703化學(xué)學(xué)碩 288分
+4
|
旅行中的紫葡萄 2026-03-03 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 化工270求調(diào)劑 +10 | 什么名字qwq 2026-03-02 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 化學(xué)0703求調(diào)劑 學(xué)碩 理/工科均可 總分279 +3 | 1一11 2026-03-03 | 5/250 |
|
|
|
[考研]
材料工程專碩283求調(diào)劑
5+8
|
，！？ 2026-03-02 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 化學(xué)，材料，環(huán)境類求調(diào)劑 +7 | 考研版棒棒 2026-03-02 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料085601調(diào)劑 +5 | 多多子. 2026-03-02 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 哈工大計(jì)算機(jī)劉劼團(tuán)隊(duì)招生 +4 | hit_aiot 2026-03-01 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 279求調(diào)劑 +3 | dua1 2026-03-01 | 4/200 |
|