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al597032982鐵蟲 (初入文壇)
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[求助]
點突變求助，求問關(guān)于大腸桿菌對線性質(zhì)粒的修復(fù)過程 已有1人參與
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各位大佬請問一下我把環(huán)P后的突變質(zhì)粒用DpnI消化后膠回收純化，然后直接轉(zhuǎn)化到大腸桿菌中，但是測序的時候發(fā)現(xiàn)在P出的兩個末端之間插入了整數(shù)個引物的序列，一般在十個左右，按理說應(yīng)該已經(jīng)除掉引物和模板碎片了，不知道為什么還會有這種情況。 PCR的引物一開始用的是反向互補(bǔ)的，插入現(xiàn)象很嚴(yán)重，幾乎所有陽性克隆都有插入片段；后來改用不完全互補(bǔ)的引物之后，稍微好了點但是也有個別的出現(xiàn)了插入，這樣看應(yīng)該也不是PCR引入的啊。 另外想請問一下大腸桿菌的連接酶的工作原理，是連接任意平末端么。 謝謝大佬們  。 |
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2樓2020-06-03 18:57:07
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3樓2020-06-06 09:51:39
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