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5點(diǎn)半起新蟲 (初入文壇)
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[求助]
小白求助,比較啰嗦 已有2人參與
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載體是PMD-19T,目的基因750bp。連接轉(zhuǎn)化之后,用載體通用引物菌P,條帶是在750bp處,為什么呢?菌P是P的目的基因,還是整個(gè)載體?還有,作為線性載體,和目的基因連接之后是環(huán)狀的嗎? 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
用戶注銷 (職業(yè)作家)
鐵桿木蟲 (著名寫手)
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1.因?yàn)椴迦肫?50bp,用載體上引物菌檢pcr,條帶略大于750bp 2.菌檢當(dāng)然是看是否插入了目的片段 3.是環(huán)狀的 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |

木蟲 (正式寫手)
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載體和目的基因連接是雙酶切或單酶切載體和目的片段后,各產(chǎn)生黏性末端或者平末端,然后連接起來。通用引物的上下游引物一般在載體多克隆位點(diǎn)兩端附近,往載體上連片段用的是多克隆位點(diǎn)上的酶切位點(diǎn),插入外源片段后用通用引物PCR檢測(cè)結(jié)果大小就和外源片段相近。 你用的PMD-19T好像是已經(jīng)線性化的載體,相當(dāng)于已經(jīng)在多克隆位點(diǎn)酶切開了,而且是兩端都是黏末端載體,需要擴(kuò)出來兩端都是黏末端的片段(用Taq酶擴(kuò)增)直接跟它連接,連起來就是個(gè)環(huán)狀的。 |
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