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[求助]
LR重組出現(xiàn)了問題，求助
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在寒假前BP重組構(gòu)建了一批pDONR質(zhì)粒，挑單克隆之后提了質(zhì)粒送去測序。 測序用的是pDONR引物，結(jié)果是正確的，能blast出相應(yīng)產(chǎn)物。 之后用這批pDONR去做LR重組，長的菌不是特別多，挑取單克隆后提質(zhì)粒，然后去轉(zhuǎn)染293T。但是轉(zhuǎn)染的細(xì)胞做wb沒有條帶，什么條帶都沒有，連csfb條帶也沒有。 之后又挑菌做了菌液PCR，用的是擴增目的基因的時候使用的引物，沒有擴出任何條帶。 又重新?lián)Q酶做了LR重組，克隆子也沒有任何菌液PCR條帶。 可能是什么地方出了問題呢？ 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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