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EDC/HoBt在水相中催化酰胺反應的諸多疑問! 已有1人參與
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本人最近在做透明質(zhì)酸(HA)的羧基與胱胺二鹽酸鹽(CYS)的氨基生成酰胺的反應。結(jié)果打核磁發(fā)現(xiàn)CYS并沒有接上去。想請教一下各位大佬原因! 1)反應溶劑。因為透明質(zhì)酸只溶于水,通過參考文獻,我選擇了pH6.8的磷酸鹽緩沖液作為反應溶劑。 2)催化體系。因為NHS水溶性不好,所以我用的是EDC.HCl和HoBt(HoBt是溶解到極少量的DMF中加入的). 3)活化時間。我選擇了攪拌活化2h后再加入CYS 咨詢了一些師兄師姐,但是還是沒搞明白,有幾個問題要問: 1)pH的調(diào)節(jié)問題。因為EDC.HCl和CYS都帶鹽酸,所以加入之后反應體系的pH大概下降到5左右。 有必要通過加入NaOH把pH調(diào)回6.8嗎? 有人說EDC.HCl的最佳pH在4-6之間。但是,有人又說pH過酸會影響氨基部分的活性。 2)活化時間。 催化形成的活性酯在水溶液中是不是非常不穩(wěn)定,所以我應該縮短活化時間到15min-30min嗎? 3)在查閱文獻時發(fā)現(xiàn)有人用的EDC.HCl/sulfo-NHS,sulfo-NHS的水溶性比NHS要好些,但是跟HoBt相比,價格實在是有點過高了。 但是從機理上分析HoBt和sulfo-NHS的作用都是相同的。我有必要改用sulfo-NHS嗎? 馬上就要研三了。疫情耽誤了三個月的實驗時間,F(xiàn)在材料合成不出來,整個人非常著急,求求有過經(jīng)驗的大家給出一些有用的意見!感激不盡。liuanan@liubin |
鐵蟲 (初入文壇)
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