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DNA解旋酶與DNA的結(jié)合檢測(gel-PAGE與EMSA結(jié)果矛盾)
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請問有人做過DNA解旋酶和DNA結(jié)合相關(guān)的實(shí)驗嗎? 我最近將DNA解旋酶和單鏈DNA孵育后,用瓊脂糖凝膠電泳檢測,確實(shí)是有結(jié)合的:結(jié)合后的有條帶,與對照組的單鏈DNA條件相差大約100bp大小,區(qū)分度很好。 但是用EMSA跑膠,只有單鏈DNA的條帶,卻沒有結(jié)合的條帶,請問可能是什么原因?(染蛋白也是沒有條帶的) EMSA用的試劑為thermo Fisher購買的Electrophoretic Mobility Shift Assay (EMSA) Kit (E33075);即用sybr green染的DNA,用SYPRO染的蛋白。我的配膠是用的6%的非變性膠,實(shí)驗過程該試劑盒參照說明書進(jìn)行。 |
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