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mengoer新蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
乳酸菌敲除 LiAc-DTT法
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參考文獻(xiàn)方法。 1%接種于1%甘氨酸的MRS培養(yǎng)基中， 4小時(shí)后取出， 冰浴30min， 以100 mM LiAc, 10 mM DTT, 0.6 M sucrose, and 10 mM Tris-HCl, pH 7.5室溫下處理30min。 用一下溶液洗滌 bidistilled water 2.0ml, bidistilled water 1 ml, 50 mmol/l EDTA 1 ml, bidistilled water 1 ml, 0.3 mol/l sucrose 1 ml, 0.3 mol/l sucrose 最后重懸于0.3 mol/l sucrose 我的問(wèn)題： 1這個(gè)方法有沒(méi)有什么問(wèn)題 2溶液配制 100 mM LiAc, 10 mM DTT, 0.6 M sucrose, and 10 mM Tris-HCl, pH 7.5 LiAc于ddH2O溶解后，如何調(diào)pH。必須用醋酸嗎?如何滅菌？？有說(shuō)過(guò)濾膜的，也有說(shuō)121℃ 15min的。 DTT用ddH2O溶解后，過(guò)濾膜，分裝到1.5mL EP管，放在-20℃冰箱。之后發(fā)現(xiàn)有的是管澄清透明，有點(diǎn)是白色的。 以上所有溶液都是調(diào)到pH 7.5嗎 加甘氨酸的MRS培養(yǎng)基配置方法：0.5M的蔗糖、1%甘氨酸是直接加到MRS中跟著一起滅菌嗎??還是分開(kāi)配置，過(guò)濾除菌后再跟滅菌好的MRS混合？？@biostar2009 |
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2樓2019-08-24 15:12:42
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