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含羞草liu新蟲 (小有名氣)
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[交流]
基因組抽提如何避免鹽析出
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大家好!我最近在抽提動(dòng)物基因組時(shí),遇到了一些問題,麻煩高手幫忙解疑。 我采用傳統(tǒng)方法抽提基因組的。具體步驟為: 1. 液氮磨碎樣品,加1ml基因組抽提Buffer(組分為:10mM Tris-HCl,100mM EDTA,1% SDS)和10ul蛋白酶K 50度水浴消化過夜; 2. 后加2ul RNase A 37度消化1h; 3. 加等體積的酚:氯仿:異戊醇,混勻10min,離心取上清,共純化兩遍; 4. 取上清,加等體積的氯仿(-20度保存),混勻10min,離心后取上清; 5. 加等體積的異丙醇和1/10體積的醋酸鈉,混勻。 問題就在這第5步,加過異丙醇和醋酸鈉后,馬上就開始出現(xiàn)白色絮狀沉淀,然后再混時(shí),很快就出現(xiàn)很多顆粒狀的白色東西,離心后發(fā)現(xiàn),管底有非常多白色的沉淀,是鹽。之后用75%乙醇也洗不掉。同樣的方法做過很多次,之前從來(lái)沒遇到這種情況,不知怎么鹽會(huì)析出。請(qǐng)高手指點(diǎn),感激不盡。! 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |

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