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swatow_yu新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
關(guān)于qPCR絕對(duì)定量質(zhì)粒標(biāo)曲模板加量的問(wèn)題 已有2人參與
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各位師兄師姐，有個(gè)關(guān)于qPCR絕對(duì)定量的問(wèn)題想請(qǐng)教。 這是一個(gè)用絕對(duì)定量方法，構(gòu)建質(zhì)粒，求得標(biāo)曲，代入待測(cè)樣本Ct值求拷貝量的實(shí)驗(yàn) 的菜鳥(niǎo)實(shí)驗(yàn)。 然后本菜狗被一個(gè)問(wèn)題繞暈了。希望大佬們解答。 1，質(zhì)粒nanodrop測(cè)得濃度，公式 （6.02×10^9×濃度×10^-9）/（質(zhì)粒bp+連接片段bp）×660 =拷貝數(shù)（copies/μL）。 將上面質(zhì)粒濃度稀釋到10^9copies/μL，因?yàn)閱挝皇莄opies/μL，就開(kāi)始有點(diǎn)繞不明白 2，體系20μL如下： permix（10μL）、 F引物（0.8μL）、 R引物（0.8μL）、 ROX校正熒光（0.4μL）、 水（6μL）、 待測(cè)模板/標(biāo)曲質(zhì)粒（2μL）。 3，問(wèn)題是： 整個(gè)標(biāo)曲體系中加了 2μL 的 10^9（copies/μL） ~10^1（copies/μL）的標(biāo)曲質(zhì)粒DNA，那么此刻體系含有的拷貝量就是 2μL x 10^9 copies，那么這一個(gè)梯度的標(biāo)曲體系，它的拷貝量是算作 10^9 還是 2x10^9 ？？？。。 在畫(huà)標(biāo)曲的時(shí)候，這一個(gè)梯度的坐標(biāo)應(yīng)該是 x2μL 還是不 x2μL ，不 x2 的話待測(cè)模板的濃度是不是也不 x2μL。 4，因?yàn)榭戳藙e人的實(shí)驗(yàn)記錄，是體系加2μL的標(biāo)曲質(zhì)粒DNA或者待測(cè)模板，但是標(biāo)曲的拷貝數(shù)坐標(biāo)并沒(méi)有 x2， |
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wj01020701
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