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實(shí)驗(yàn)技術(shù)及原理指南
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實(shí)驗(yàn)技術(shù)及原理指南 需要的可見附件 目 錄 一、DNA實(shí)驗(yàn)技術(shù) 1 01、動(dòng)物基因組DNA的提取 1 02、質(zhì)粒DNA的提取 2 03、DNA的瓊脂糖凝膠電泳 9 04、重組質(zhì)粒的連接、轉(zhuǎn)化及篩選 12 05、cDNA文庫構(gòu)建 15 06、變性梯度凝膠電泳 19 07、Southern Blot原理及實(shí)驗(yàn)方法 20 08、基因定點(diǎn)突變 23 09、凝膠遷移實(shí)驗(yàn)（EMSA） 26 10、SSR分子標(biāo)記實(shí)驗(yàn)操作及其注意事項(xiàng) 30 11、單核苷酸多態(tài)性（SNP）實(shí)驗(yàn) 33 12、染色質(zhì)免疫共沉淀（ChIP） 35 13、DNA亞硫酸氫鹽修飾和純化操作步驟（甲基化） 38 二、RNA實(shí)驗(yàn)技術(shù) 41 14、Trizol法提取總RNA 41 15、RNA的瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)原理和步驟 42 16、mRNA的分離純化 44 17、RNA干擾實(shí)驗(yàn) 47 18、Northern Blot原理及實(shí)驗(yàn)方法 51 19、原位雜交實(shí)驗(yàn) 54 20、熒光原位雜交實(shí)驗(yàn)（FISH） 56 21、siRNA表達(dá)載體的構(gòu)建 59 22、石蠟切片制作(蘇木精-伊紅對(duì)染法) 62 三、PCR實(shí)驗(yàn)技術(shù) 67 23、普通PCR、原位PCR、反向PCR和反轉(zhuǎn)錄PCR基本原理和操作步驟 67 24、逆轉(zhuǎn)錄PCR 73 25、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR） 74 26、菌落PCR 76 27、降落PCR 77 28、逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR) 78 29、實(shí)時(shí)熒光定量PCR具體實(shí)驗(yàn)步驟 80 30、目的基因PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的克隆 84 31、PCR產(chǎn)物的TA克隆 (DNA的膠回收和連接) 86 32、原位PCR技術(shù)基本原理、類型、步驟和應(yīng)用 89 33、熒光原位雜交 93 34、重疊延伸PCR實(shí)驗(yàn) 95 35、AFLP原理和操作步驟 96 36、限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(RFLP) 98 37、ddRT-PCR(差示反轉(zhuǎn)錄PCR,又mRNA差別顯示技術(shù)) 99 38、PCR-SSCP實(shí)驗(yàn)步驟 102 四、蛋白質(zhì)實(shí)驗(yàn)技術(shù) 107 39、SDS-PAGE蛋白質(zhì)樣品的制備 107 40、蛋白質(zhì)含量測(cè)定法 107 41、蛋白質(zhì)的表達(dá)、分離、純化實(shí)驗(yàn) 115 42、Western blot 詳細(xì)操作步驟 117 43、免疫組化操作步驟 123 44、免疫共沉淀Co-IP實(shí)驗(yàn)操作步驟 133 45、等電聚焦電泳法測(cè)定蛋白質(zhì)的等電點(diǎn) 134 46、雙向電泳操作步驟及相關(guān)試劑配制 138 47、ELISA步驟、試劑及注意事項(xiàng) 142 48、病毒感染細(xì)胞實(shí)驗(yàn)整體流程及原理 144 五、感受態(tài)細(xì)胞的制備及其轉(zhuǎn)化技術(shù) 149 49、大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞制備實(shí)驗(yàn)（CaCl2法） 149 50、農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備 150 51、畢氏酵母（Pichia pastoris）感受態(tài)細(xì)胞制備及轉(zhuǎn)化 153 52、大腸桿菌轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)（熱擊法） 156 53、IPTG誘導(dǎo)蛋白表達(dá)的原理及方法步驟 157 54、質(zhì)粒轉(zhuǎn)染大腸桿菌 158 55、細(xì)胞轉(zhuǎn)染操作方法 160 56、真核細(xì)胞轉(zhuǎn)染操作方法 162 六、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)技術(shù) 165 57、原代細(xì)胞培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)的方法 165 58、細(xì)胞原代培養(yǎng)、傳代培養(yǎng)、凍存和復(fù)蘇 166 59、原代細(xì)胞的培養(yǎng)與建系 168 60、細(xì)胞周期測(cè)定實(shí)驗(yàn) 178 61、細(xì)胞凋亡檢測(cè)，細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)步驟，檢測(cè)方法 181 62、細(xì)胞凋亡檢測(cè)實(shí)驗(yàn)（Annexin V/PI雙染色法） 193 63、細(xì)胞增殖檢測(cè)：MTT法 194 64、MTT法測(cè)定細(xì)胞相對(duì)數(shù)和相對(duì)活力 197 65、抗腫瘤藥物5-氟尿嘧啶對(duì)腫瘤細(xì)胞遷移的影響（細(xì)胞劃痕法） 198 66、Transwell實(shí)驗(yàn)方法 204 67、TUNEL法檢測(cè)細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)原理和方法 214 |
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