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xydlengyue金蟲 (正式寫手)
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[求助]
接合轉(zhuǎn)移后篩選單交換子問題
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rt 本人最近在做奇異變形桿菌的一個基因的敲除 前面都蠻順利的 然后到了接合轉(zhuǎn)移后篩選單交換子這一步了 進行了無數(shù)次 就是無法pcr出兩條長短不一的條帶。 我是這么做的 把鑒定正確的連接到t載體上的包含自殺性的缺失基因（連接產(chǎn)物在感受態(tài)細胞x7213中）作為供體菌，野生株作為受體菌 搖到2個濃度差不多時候 各取100微升 放入500微升的lb中 不加抗生素 過夜搖菌 然后取100微升涂到氯霉素抗性平板上 挑選單菌落在加了氯霉素的lb中搖菌鑒定 然后pcr鑒定（酶是2xestaq 藍色的） 但是一直只有一條帶（沒有缺失的） 求助為什么 奇異變形桿菌之前在加了氯霉素的lb中不生長 但是結(jié)合轉(zhuǎn)移了之后就可以生長 按理說是轉(zhuǎn)進去了 但是為什么pcr鑒定不出來 只能鑒定出來野生型的那條帶 沒有缺失的 心態(tài)快炸了 |
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xydlengyue
金蟲 (正式寫手)
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2樓2019-06-26 16:19:00
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