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不完美的m新蟲 (初入文壇)
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[求助]
藍白斑篩選出現(xiàn)非菌落的藍色東西
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| 本人小白，請教一下各位大神，最近在做分子克隆。在進行藍白斑篩選的時候平板上出現(xiàn)了很小很小的藍色的東西，白色的一個都沒有，我想問下，那個藍色的是什么東西？為什么會出現(xiàn)這種情況呢？注：1、我所克隆的分子片段2500左右，PCR產(chǎn)物回收后跑膠驗證條帶正常。2、按照PCR的體系（沒有加引物，使用Taq DNApoly酶，沒有dATP，用的dNTP代替的），72℃，反應10min。加A尾巴。之前也是這么做的。3、接著做連接（使用T-Vector。DH5a。按照標準操作進行的).涂板第二天出現(xiàn)藍色東西，感覺菌落一個都沒有長出來。不知道是什么東西，更不知道什么原因。求教！ |
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西門吹雪170: 金幣+2, 鼓勵回帖交流 2019-05-25 22:49:30
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我最近也在做藍白斑篩選，一般藍斑表示非重組載體而白斑才是我們要的，白色的菌沒有，可能是連接試劑盒有問題，用連接試劑盒給的那個DNA去試一下，看有沒有白色菌落，如果有，說明你的模板有問題，如果沒有白色菌落，那就是你的試劑盒有問題。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2019-05-23 10:50:38
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西門吹雪170: 金幣+2, 鼓勵回帖交流 2019-05-25 22:49:45
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補充下，就算是白色的，也不一定就是你想要的，可能有小片段的DNA也插入到了載體上，破壞了那個β-半乳糖苷酶的閱讀框架，導致菌落呈現(xiàn)白色菌落。 而有時候藍色菌進行快速pcr檢測的時候，同樣也可以p出來，可能是前段插入了，但是沒有破壞閱讀框架 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
5樓2019-05-23 10:54:30
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