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qibowen123新蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
PEG介導(dǎo)的真菌原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化子長(zhǎng)不大 只有白白的菌絲 已有1人參與
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最近在做米曲霉原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化，用的是雙層缺陷培養(yǎng)基，質(zhì)粒帶精氨酸合成基因。理論上，導(dǎo)入后可以在缺陷培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。 問(wèn)題是，PEG轉(zhuǎn)化后，上層培養(yǎng)基能長(zhǎng)出細(xì)小的白色菌絲，且生長(zhǎng)到一定程度就不長(zhǎng)了。 挑出接到豐富培養(yǎng)基可以繼續(xù)長(zhǎng)，在接回 缺陷培養(yǎng)基上就不長(zhǎng)了。這正常嗎？ 真菌轉(zhuǎn)化系統(tǒng)的陽(yáng)性轉(zhuǎn)化子到底應(yīng)該怎么篩選，陽(yáng)性轉(zhuǎn)化子應(yīng)該長(zhǎng)什么樣�。ㄎ覐膩�(lái)沒(méi)見(jiàn)過(guò)T.T） 卡在這個(gè)問(wèn)題上3個(gè)月了，求大神幫忙 |
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ERIC20081938
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3樓2020-06-04 11:36:20
france5885
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2樓2019-11-07 09:52:59
| 請(qǐng)問(wèn)樓主，你的問(wèn)題解決了嗎？我最近也在做米曲霉轉(zhuǎn)化，跟你遇到的問(wèn)題類似，平板培養(yǎng)第二天就長(zhǎng)出了小菌絲菌落，菌落長(zhǎng)不大，因?yàn)榭瞻讓?duì)照（未轉(zhuǎn)質(zhì)粒）也長(zhǎng)了相同的菌絲菌落，所以這種情況應(yīng)該是假陽(yáng)性，為什么出現(xiàn)假陽(yáng)性，猜測(cè)一種原因是原生質(zhì)體過(guò)濾的時(shí)候有未酶解完全的短小菌絲混進(jìn)去，另外可能米曲霉出現(xiàn)了缺陷性狀丟失（恢復(fù)了精氨酸合成功能），但是如果長(zhǎng)不大的話，后面一種可能性不大�？傊軌虺善L(zhǎng)的才可能是真陽(yáng)性，長(zhǎng)不大的是假陽(yáng)性。不知樓主后面的實(shí)驗(yàn)怎么樣？希望能交流一下 |
4樓2023-04-06 15:04:10
光麟之光
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5樓2023-06-15 23:27:29
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