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接合轉(zhuǎn)化做基因敲除遇到問題
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| 我最近在做基因敲除，野生菌為鞘氨醇菌，克隆了目標(biāo)基因上下游序列，中間加入卡那抗性基因，構(gòu)建到了pEX8Tc載體上，之后轉(zhuǎn)入到了SM10 λpir中與野生菌雙親接合轉(zhuǎn)化，在LB平板上過夜結(jié)合后，涂布到了Km，Sm雙抗平板上，結(jié)果長出許多菌落，之后劃線到15%蔗糖LB平板也能生長，但是驗證了長的菌株是SM10 λpir，并不是野生菌。在此之前已驗證過野生菌是抗Sm，不抗的Km，并且可以在15%蔗糖LB平板生長；SM10 λpir（pEX8Tc）抗Km，不抗Sm，不能在15%蔗糖LB平板生長。接合之后怎么會出現(xiàn)這種情況了呢，希望哪位大神能幫忙解答一下，不勝感激�。�！ |
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3樓2019-04-01 09:04:41
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