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星庭光耀新蟲 (初入文壇)
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[求助]
overlap pcr具體過程
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最近要合成一個(gè)126bp的基因,直接用引物合成不添加模板,老板說用overlap pcr合成。已經(jīng)設(shè)計(jì)了一對(duì)引物,但是后面用的pcr溫度,循環(huán)數(shù),酶什么的,保存啊一頭霧水(研一剛接觸這么東西所以)。有可以給我說說后面具體該怎么操作的大神? 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
新蟲 (初入文壇)
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兩條引物中間得有同源序列,所以得合兩條大引物,或者三條小引物,退火的時(shí)候彼此在末端anneal上,三條引物用退火的方式連接在一起,這樣經(jīng)過PCR反應(yīng)就能得到一條大的片段,條件跟普通pcr差不多。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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