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童劍軍新蟲 (初入文壇)
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[求助]
菌液PCR與質(zhì)粒PCR 已有2人參與
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各位大佬 在下做的是將構(gòu)建好的質(zhì)粒轉(zhuǎn)入到大腸桿菌DH5α中擴增 結(jié)果就是挑菌搖菌之后 用菌液為模板做PCR結(jié)果都沒有 但是把該菌液用試劑盒提取質(zhì)粒之后 用質(zhì)粒PCR鑒定 有目的條帶 大小也正確 讓在下疑惑的是 同樣的引物 為什么質(zhì)粒PCR可以正常擴增目的條帶 但是菌液PCR卻做不出來 請各位大佬 幫忙解釋一下 幫在下解惑 萬分感謝！ @biostar2009 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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5樓2019-03-20 23:10:42
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3樓2019-03-18 08:54:04
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
西門吹雪170: 金幣+3, 鼓勵回帖交流 2019-03-18 21:05:28
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西門吹雪170: 金幣+3, 鼓勵回帖交流 2019-03-18 21:05:28
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可以考慮一下你引物的問題了，原因是：質(zhì)粒PCR可以，你已經(jīng)去除了蛋白和其他雜質(zhì)，說明沒有問題 你菌液pcr，如果只是單純的挑個單菌落作為pcr模板，菌液裂解會釋放核酸和蛋白，如果你引物設(shè)計的恰好和其他質(zhì)粒外的DNA有一些不良結(jié)構(gòu)，沒有結(jié)果也是意料中的可能； 建議，如果是菌液pcr，你可以試一下，把菌落煮沸以后，離心取上清做模板，可能有結(jié)果  |
4樓2019-03-18 12:52:12
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