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jishanfan金蟲 (初入文壇)
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[求助]
C-Ag-C的DNA錯(cuò)配,能進(jìn)行電泳實(shí)驗(yàn)嗎?有誰(shuí)做過嗎?
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“silver ions-mediated conformational switch: facile design of structure-controllable nucleic acid probes”在這篇論文中,利用了基于銀離子的C-C錯(cuò)配方法,構(gòu)造了一個(gè)檢測(cè)銀離子的分子信標(biāo),我特別感興趣,想利用電泳的方法復(fù)現(xiàn)一下實(shí)驗(yàn),我設(shè)計(jì)了兩條DNA單鏈: D1:5'-TATCTCCACTCTACCAAT-3' D2:5'-ATTCCTACACTCCACATA-3' buffer我用的是10mM的MOPS,硝酸鎂15mM,硝酸銀0-5微摩(梯度實(shí)驗(yàn)),EDTA Na2 1mM 兩條DNA鏈溶解在20微升的buffer里面,濃度各為1微摩 實(shí)驗(yàn)方法,先將樣品在90度保持10min,再以每分鐘0.5度的速率降溫,降到15度,然后保持1h,然后在12%的PAGE膠中進(jìn)行電泳實(shí)驗(yàn),電壓70V,電泳2h,用stains-all染色劑進(jìn)行染色處理,卻只在膠片上看到了單鏈的染色道,沒看到雙鏈的染色道,之后換了好幾組DNA序列,發(fā)現(xiàn)是同樣的情況,所以我現(xiàn)在很疑惑,是我的實(shí)驗(yàn)方法出現(xiàn)了問題還是,序列,藥品用量出現(xiàn)了問題。 我特別希望您能給我一些實(shí)驗(yàn)的建議和指導(dǎo),如果您能在百忙之中,抽時(shí)間回復(fù)我的郵件,我將不勝感激,不勝榮幸! 我的郵箱:2295315930@qq.com |
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