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細胞轉染實驗中為什么不能加血清？
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傳統(tǒng)的轉染試劑有一定的細胞毒性，在轉染過程由于提高細胞的通透性因而不能在培養(yǎng)基中添加抗生素。如，陽離子脂質體。帶正電的脂質體與核酸帶負電的磷酸基團形成復合物被細胞內吞。血清中含有大量的蛋白質，在轉染過程中，帶負電的蛋白質可能干擾陽離子脂質體對核酸的吸附，影響轉染效率。另外，使用脂質體等轉染試劑時，由于含血清轉染會將血清中的蛋白帶入細胞，引發(fā)細胞毒性，導致轉染效率降低，故不能有血清轉染。這些轉染試劑要求在轉染前換無血清培養(yǎng)基，轉染后4-6h在更換成有血清培養(yǎng)基，這其實是為了減輕轉染造成的細胞毒性。 不同的細胞及轉染試劑要求轉染的條件是不同的。最好是在第一次實驗前做一個預實驗，比如：HeLa，293，CHO，COS7， MCF－7，HepG2等細胞，是否加血清，對不同的細胞是有不同的影響的，有些細胞是可以有血清的，有些加血清就會受影響。所以，普通的轉染試劑一定要進行預實驗，和條件優(yōu)化。 轉染后在6小時左右最好換液且換為有血清的培養(yǎng)基，其一因為普通轉染試劑對細胞的毒性作用大，其二可降低因血清的缺乏引起的細胞的死亡。轉染時不加血清是防止血清的干擾作用，轉染后可適時加入。加入過早會引起未轉染細胞的優(yōu)勢生長，過晚會引起較多細胞死亡�？蓪崟r觀察1/5細胞變圓的時候加入血清。 現(xiàn)在市面上也有一些改進了的轉染試劑，可以在轉染時含有血清，如Entranster試劑，只濃縮包裹核酸不會將血清帶入細胞。Entranster采用有血清轉染，不用在有血清和無血清之間更換，增加工作量，同時有血清轉染不僅不造成細胞毒性，而且由于血清的存在，有利于細胞的狀態(tài)維護，提高轉染效率。 由于Entranster的內毒素和細胞毒性都非常之低，加上轉染復合物能夠高效的在完全培養(yǎng)基中形成，因而整個轉染過程可以在含血清而且是含有抗生素的培養(yǎng)基中操作，無需更換培養(yǎng)基，這極大的方便轉染操作！適用于包括干細胞，神經(jīng)細胞，原代細胞和其他方法難轉染細胞的轉染在內的多種真核細胞。 細胞毒性的大小往往意味著對細胞生理活動影響的大小。這會對相關研究數(shù)據(jù)產生嚴重的干擾，甚至影響研究的結論。因此，選擇一種高效方便的轉染試劑是細胞轉染成功的關鍵。 |
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