 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2196 | 回復(fù): 10 | |||
| 【懸賞金幣】回答本帖問題，作者柏拉圖的理想將贈送您 5 個金幣 | |||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點擊這里查看本話題的所有回帖 | |||
[求助]
原味熒光雜交（FISH）細(xì)節(jié)求教 已有1人參與
|
|||
|
rt，樓主現(xiàn)在正在做FISH實驗遇到了幾個問題，想請教下各位同行。問題如下： 1. 原位雜交一般是有個帶熒光的探針和DAPI復(fù)染，那請問在激光共聚焦上看的時候是選擇熒光探針的激發(fā)和發(fā)射波長，還是說要包括DAPI的激發(fā)和發(fā)射波長，從而進(jìn)行圖片疊加呢？ 2. 像我們實驗室激發(fā)波長最低是488nm，明顯超過DAPI的340nm上限，那為什么我還能在激光共聚焦上看到有藍(lán)色的部分？ 3. 用DAPI復(fù)染的目的是什么？是為了觀察其他沒攜帶探針的微生物嗎？如果是，那可否不進(jìn)行復(fù)染呢？ |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
推薦一些20種氨基酸檢測的實際應(yīng)用案例
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗中的趣事：實驗器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有99人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗中的趣事：和實驗材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
Davidzjy
鐵桿木蟲 (正式寫手)
- MolEPI: 3
- 應(yīng)助: 209 (大學(xué)生)
- 金幣: 6650.8
- 散金: 431
- 紅花: 22
- 帖子: 964
- 在線: 393.2小時
- 蟲號: 1887475
- 注冊: 2012-07-11
- 專業(yè): 人類遺傳學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
|
首先要搞清楚雜交的對象 這個實驗中雜交的對象是rRNA（即用于標(biāo)記pepins中的核糖體） 所使用的nonsense探針是前面各個rRNA探針序列的互補(bǔ)鏈 用于排除rDNA的干擾 明白了這塊的實驗設(shè)計 再來看圖 圖A中使用的幾種探針 都是針對細(xì)菌rRNA的探針 因此能夠看到信號 圖C中使用的nonsense探針 由于這些雜交的區(qū)域沒有對應(yīng)的DNA 自然沒有信號 說明這些前面的信號不是rDNA的干擾 （DAPI通道下能看到一些點點可能是細(xì)胞中其他含有核酸分子的微小結(jié)構(gòu) ）兩張圖的信息加起來說明這里確實聚集了不少核糖體 由此 文章中得出了這樣的結(jié)論 Fluorescence in situ hybridization (FISH) with probes specifically targeting ribosomal RNA sequences of Thiomargarita confirmed that ribosomes were indeed present and concentrated in these membrane-bound structures (Figs. 2 and S6 to S8), which were spread throughout the entire cell, including the apical buds (Fig. S8). |
8樓2023-02-05 11:59:37
恒意賽teh 
木蟲 (文壇精英)
- 應(yīng)助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 1661.4
- 散金: 5641
- 沙發(fā): 2
- 帖子: 16933
- 在線: 592.4小時
- 蟲號: 27632785
- 注冊: 2021-10-28
- 性別: GG
- 專業(yè): 老年病藥物藥理
2樓2023-01-15 15:08:41
恒意賽teh
木蟲 (文壇精英)
- 應(yīng)助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 1661.4
- 散金: 5641
- 沙發(fā): 2
- 帖子: 16933
- 在線: 592.4小時
- 蟲號: 27632785
- 注冊: 2021-10-28
- 性別: GG
- 專業(yè): 老年病藥物藥理
3樓2023-01-15 15:10:11
Davidzjy
鐵桿木蟲 (正式寫手)
- MolEPI: 3
- 應(yīng)助: 209 (大學(xué)生)
- 金幣: 6650.8
- 散金: 431
- 紅花: 22
- 帖子: 964
- 在線: 393.2小時
- 蟲號: 1887475
- 注冊: 2012-07-11
- 專業(yè): 人類遺傳學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
|
從原理的角度講 FISH的探針通常標(biāo)記一個比較小的片段 這種熒光信號太小 在低倍鏡下很難找 DAPI這類復(fù)染劑的作用就是顯示細(xì)胞核位置的 你看復(fù)染劑的英文counterstain 其中前綴counter-表示“相反的” stain表示“染色;染料” 一般的顯微操作流程 也是先在低倍鏡下用DAPI找到細(xì)胞對好焦 然后切到高倍鏡 定下視野再切換到探針對應(yīng)的通道來觀察信號 至于最后一個問題 個人理解LZ的意思是問為什么肉眼能看到藍(lán)光打在玻片上——因為DAPI的激發(fā)光屬于紫外線范圍 而濾光片會保留光譜上與激發(fā)光相近波長的光線 因此在光譜上與紫外線相鄰的可見光（藍(lán)紫色光）就被漏過了 一個類似的例子 實驗室、醫(yī)院里常用的紫外消毒燈在工作時 肉眼看也是發(fā)藍(lán)紫色光 |
4樓2023-01-24 12:36:05
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 0854總分272 +5 | 打小就是老實人 2026-03-02 | 6/300 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 歡迎采礦、地質(zhì)、巖土、計算機(jī)、人工智能等專業(yè)的同學(xué)報考 +8 | pin8023 2026-02-28 | 11/550 |
|
|
|
[考研]
 0703化學(xué)學(xué)碩 288分
+4
|
旅行中的紫葡萄 2026-03-03 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0856材料工程，初試313調(diào)劑 +7 | 賣個關(guān)子吧 2026-03-03 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 理學(xué)，工學(xué)，農(nóng)學(xué)調(diào)劑，少走彎路，這里歡迎您！ +8 | likeihood 2026-03-02 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +4 | Guo_yuxuan 2026-03-02 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 299求調(diào)劑 +5 | kkcoco25 2026-03-02 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 化工335求調(diào)劑 +5 | 摸摸貓貓頭 2026-03-02 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料化工調(diào)劑 +13 | 今夏不夏 2026-03-01 | 16/800 |
|
|
|
[考研] 085600求調(diào)劑 +4 | LRZZZZZZ 2026-03-02 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0856材料調(diào)劑 +5 | 沿岸有貝殼OUC 2026-03-02 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 272求調(diào)劑 +9 | 材紫有化 2026-02-28 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 302材料工程求調(diào)劑 +5 | Doleres 2026-03-01 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 材料工程274求調(diào)劑 +5 | Lilithan 2026-03-01 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿中石油（華東）本科齊魯工業(yè)大學(xué) +3 | 石能偉 2026-03-02 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 295求調(diào)劑 +8 | 19171856320 2026-02-28 | 8/400 |
|
|
|
[基金申請] 此成果不能導(dǎo)入原因：元數(shù)據(jù)必填信息不完整，可 進(jìn)行補(bǔ)充。 +4 | Kittylucky 2026-03-02 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 264求調(diào)劑 +4 | 巴拉巴拉根556 2026-02-28 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 279求調(diào)劑 +3 | dua1 2026-03-01 | 4/200 |
|
|
|
[高分子] 求環(huán)氧樹脂研發(fā)1名 +3 | 孫xc 2026-02-25 | 11/550 |
|