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Forzzainter新蟲 (初入文壇)
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[交流]
同源重組連載體，長得菌搖不起來，大神們知道怎么回事么？
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RT 本人最近在做同源重組連接，將2-3個片段連接到載體上。 連接酶用的是擎科sosoo同源重組連接酶；載體用的是pBI121載體，長度14758bp。 插入的片段大小1100bp左右；酶切位點用的BamH I單酶切，同源臂是擎科的技術(shù)給我設(shè)計的應(yīng)該沒問題。 載體用TAKARA的快切酶，確認酶切開。 連接時摩爾比按兩種形式進行計算。1載體：片段=1:10；2載體：總片段=1:10(即插入兩個片段時摩爾比為1:5:5；插入三個片段時摩爾比為1:3:3:3)。 熱激法轉(zhuǎn)入感受態(tài)，涂板過夜培養(yǎng)12-16h。第二天版上有長菌，但是挑出來的菌都搖不起來，不知是什么原因。 做過pBI121空載的對照，證明感受態(tài)，平板以及含抗生素的LB液體都沒問題。也排除噬菌體干擾。 有懷疑過是不是因為載體太長的緣故，但還是不太明白明明版上的菌長得很好，為什么搖不起來。按理說同源重組應(yīng)該長出來的都是陽性菌株，跪求大神解惑。  |
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8樓2020-07-27 08:55:21
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2樓2020-07-25 22:09:42
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3樓2020-07-26 00:01:49
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小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
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把lb重新配一個吧，我記得當時，我?guī)屯瑢W先挑了一批，很小很小的時候挑的，搖菌長起來了，后來長大一點后，再挑的，就都沒長起來，具體是因為什么就不太清楚了 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2020-07-26 07:53:00
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