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江湖救急 已有2人參與
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誒，慚愧。這個PCR折磨了我一個多月了。剛開始部分能p出來，幾個挑單克隆測序不對，測序出來了3個，后面再做pcr怎么p都不出來了，用什么酶都試了一遍，退火條件也試過了，都跑不出來。用基因組DNA也不行，跑出來幾個，純化后連接轉(zhuǎn)化挑不出陽性。PCR卡就算了，好幾個還都卡在陽性挑不出來，好郁悶啊，后面覺得是引物可能設的不好，所以重設了引物，但是也就提高了退火，降低了上下游的差異在差中選優(yōu)，還是沒有擴增出來。想問問有沒有有經(jīng)驗的，想請教一下，是模板的問題嗎？RNA打算重新提一下。陽性挑不出來又該怎么調(diào)整呢，用的是重組連接酶，和這個有關(guān)系嗎？ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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6樓2019-10-31 20:03:42
2樓2019-10-30 20:53:05
3樓2019-10-30 23:05:33
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小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵回帖交流 2019-10-31 22:48:05
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵回帖交流 2019-10-31 22:48:05
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首先 你這是提什么的rna rna跑膠情況圖有嗎 引物是根據(jù)什么來設計的 推薦pcr溫度多少 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2019-10-31 00:29:30
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