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零下8°新蟲 (小有名氣)
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[交流]
骨片免疫組化為什么脫蠟總是脫不干凈! 已有1人參與
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親愛的蟲友們,我在做骨片的時候,免疫組化總是脫蠟脫不干凈,不論是免疫組化還是免疫熒光顯微鏡下都是蠟,抗體根本沒法結(jié)合,我嘗試了在二甲苯,一天,兩天,一個星期,兩個星期,二甲苯里水浴加熱兩周,一個月,都不能把蠟脫干凈,前期我已經(jīng)在烘箱將骨片烘烤四到六小時了,溫度大概55-60°。求大神不吝賜教!! 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
至尊木蟲 (正式寫手)
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你所謂的骨片是否跟我們常用的HE或者免疫組化切片3-5微米厚度?如果是,你首先檢查或者換新的二甲苯。!其次,這個烤片的溫度一般60℃不能說55,大概不行,買個溫度對著烤箱頂部的孔或者直接放進去把溫度一定調(diào)好,一般烤片1-2小時就可以,太久也不好。第三,二甲苯要2缸每缸時間要10分鐘左右,太短都不行。最后,二甲苯出來你的下行(濃度梯度遞減)酒精濃度時間有問題嗎?拍幾張圖片看看,更容易知道可能你的問題在哪里。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |

新蟲 (小有名氣)
新蟲 (小有名氣)
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非常感謝您的指導(dǎo),是這樣的,我們的骨片是脫鈣脫水包埋,然后就是切片,大概也就是3-5mm,我每次做的時候都是用的新的二甲苯,新的酒精,酒精也是按照濃度梯度來的,因為實驗室的烘箱溫度無法進行精確控制,所以我說成55~60°,,我們醫(yī)院的病理科給我們切的片子,他們給我做了幾張HE染色片子,可以看到骨片的細胞,但是免疫組化,熒光抗體無法結(jié)合! 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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