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2000bp的堿基缺失后還能回復(fù)突變嗎?
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最近遇到了一怪事: 敲除了某細(xì)菌的一個(gè)ORF菌落PCR檢測(cè)和DNA測(cè)序證明是正確的敲除菌株，當(dāng)將正確的單菌落接至LB中培養(yǎng)后進(jìn)行菌液PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)有微弱的條帶和陽(yáng)對(duì)(出發(fā)菌株)一樣。開(kāi)始懷疑是敲除菌株里混有未敲除菌株，所以對(duì)剛檢測(cè)過(guò)的菌液再進(jìn)行平板劃線(xiàn)、挑單。再進(jìn)行菌落PCR檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)了好多單菌落都P出了微弱的條帶和陽(yáng)對(duì)一樣，挑沒(méi)有出現(xiàn)和陽(yáng)對(duì)一樣DNA條帶的單菌落再接至LB中培養(yǎng)，再進(jìn)行菌液PCR檢測(cè)，又P出了微弱的DNA條帶和陽(yáng)對(duì)一樣! 如果說(shuō)是敲除菌株中混有沒(méi)敲除的菌株，那在我反復(fù)分單的情況下肯定會(huì)得到純的敲除菌株。然而事實(shí)是我連續(xù)分單了2次后分別進(jìn)行菌落PCR和菌液PCR檢測(cè)，菌落PCR檢測(cè)是正確的敲除菌株，相同的菌落在LB液體里生長(zhǎng)后在菌液PCR檢測(cè)就會(huì)發(fā)現(xiàn)它不完全是正確的敲除菌株。 你們有碰到相似情況嗎?我可以將這種現(xiàn)象歸結(jié)為敲除菌株的回復(fù)突變嗎?我知道一兩個(gè)堿基突變后可以發(fā)生回復(fù)突變，2000bp的堿基缺失后還能回復(fù)突變嗎? 之前有看到蟲(chóng)友發(fā)了類(lèi)似的帖子，不知道現(xiàn)在解決了嗎，歡迎回帖啊  |
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【答案】應(yīng)助回帖
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wolfghost: 金幣+2, 積極應(yīng)助獎(jiǎng)勵(lì)~ 2021-05-12 17:28:27
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qfw_68: 博學(xué)EPI+1, 積極應(yīng)助獎(jiǎng)勵(lì)！ 2021-05-25 15:42:39
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有沒(méi)有可能是非特異性條帶？可以重新設(shè)計(jì)被敲除片段內(nèi)部的引物進(jìn)行PCR驗(yàn)證，或者把該條帶回收測(cè)序驗(yàn)證 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶(hù)端 |
2樓2021-05-10 20:31:37
3樓2021-05-12 15:48:49
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4樓2021-05-24 12:36:56
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5樓2023-05-31 23:13:16
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