 |
 |
 |
| 24小時(shí)熱門版塊排行榜 |
- >論壇更新日志 (1035)
- >考研 (123)
- >導(dǎo)師招生 (121)
- >蟲(chóng)友互識(shí) (50)
- >基金申請(qǐng) (24)
- >考博 (22)
- >教師之家 (13)
- >公派出國(guó) (12)
- >論文投稿 (12)
- >休閑灌水 (11)
- >找工作 (10)
- >論文道賀祈福 (7)
- >碩博家園 (7)
- >博后之家 (5)
- >文獻(xiàn)求助 (3)
- >藥品生產(chǎn) (2)
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 5089 | 回復(fù): 12 | ||
supergrape金蟲(chóng) (小有名氣)
|
[求助]
關(guān)于使用自殺質(zhì)粒pK18SacB進(jìn)行敲除受體菌基因組上的相關(guān)片段 已有2人參與
|
|
| RT，我在前期將pK18SacB進(jìn)行改造，把卡那霉素基因替換為氯霉素（受體菌帶有卡那霉素抗性），左右同源臂的長(zhǎng)度大小是在500bp左右，構(gòu)建好的自殺載體pK18SacB是利用大腸桿菌S17進(jìn)行接合轉(zhuǎn)移，將濾膜上的菌體洗脫后涂到含有卡那霉素和氯霉素的培養(yǎng)基上。雙抗板上確實(shí)長(zhǎng)出疑似單交換的菌株（受體菌是假單胞菌，菌落形態(tài)與大腸桿菌不一樣，很容易分辨），同時(shí)涂到雙抗板上的受體菌沒(méi)有長(zhǎng)。問(wèn)題是，當(dāng)我用左同源臂的上游引物+右同源臂的下游引物進(jìn)行菌落PCR驗(yàn)證，結(jié)果只有一左同源臂+右同源臂的目的條帶，沒(méi)有左同源臂+敲除片段+右同源臂的目的條帶（PCR延伸時(shí)間是按照左同源臂+敲除片段+右同源臂的長(zhǎng)度進(jìn)行設(shè)置的）。隨后，我設(shè)計(jì)了基因組上左同源臂的上游引物+自殺質(zhì)粒中右同源臂下游引物進(jìn)行pcr，結(jié)果沒(méi)有相關(guān)目的條帶（PCR延伸時(shí)間是按照左同源臂+敲除片段+右同源臂+300 bp的長(zhǎng)度進(jìn)行設(shè)置的）。懇請(qǐng)大佬解釋一下，雙抗板上的菌株是單交換的菌株嗎？ |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有220人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
2樓2020-01-01 21:13:28
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ...
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
supergrape: 金幣+100, ★有幫助 2020-01-12 20:21:20
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
supergrape: 金幣+100, ★有幫助 2020-01-12 20:21:20
| 左同源臂的上游引物+右同源臂的下游引物 PCR 產(chǎn)物送測(cè)序，如果是你設(shè)計(jì)的同源臂，那應(yīng)該是成功的 |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
supergrape3樓2020-01-02 19:54:08
supergrape
金蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 829
- 帖子: 88
- 在線: 21.4小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 4212283
- 注冊(cè): 2015-11-11
- 專業(yè): 微生物遺傳育種學(xué)
4樓2020-01-02 23:05:54
supergrape
金蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 829
- 帖子: 88
- 在線: 21.4小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 4212283
- 注冊(cè): 2015-11-11
- 專業(yè): 微生物遺傳育種學(xué)
5樓2020-01-02 23:09:35
6樓2020-01-03 18:55:09
supergrape
金蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 829
- 帖子: 88
- 在線: 21.4小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 4212283
- 注冊(cè): 2015-11-11
- 專業(yè): 微生物遺傳育種學(xué)
7樓2020-01-05 09:13:50
8樓2020-01-05 10:26:47
supergrape
金蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 829
- 帖子: 88
- 在線: 21.4小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 4212283
- 注冊(cè): 2015-11-11
- 專業(yè): 微生物遺傳育種學(xué)
9樓2020-01-05 19:03:19
supergrape
金蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 829
- 帖子: 88
- 在線: 21.4小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 4212283
- 注冊(cè): 2015-11-11
- 專業(yè): 微生物遺傳育種學(xué)
10樓2020-01-06 13:59:49
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 supergrape 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 求調(diào)劑 +4 | danyyyy 2026-03-04 | 4/200 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 290求調(diào)劑 +5 | Bananaiy 2026-03-04 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿東北大學(xué)080500，英一數(shù)二343分求調(diào)劑 +5 | Seele_v5 2026-03-04 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 化學(xué)專業(yè)調(diào)劑 +3 | 好好好1233 2026-03-04 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 304分材料專碩求調(diào)劑 +11 | qiuzhigril 2026-03-03 | 14/700 |
|
|
[考研] 0856材料與化工，270求調(diào)劑 +17 | YXCT 2026-03-01 | 20/1000 |
|
|
|
[考研] 322分 085600求調(diào)劑，有互聯(lián)網(wǎng)+國(guó)金及主持省級(jí)大創(chuàng)經(jīng)歷 +6 | 熊境喆 2026-03-04 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 295求調(diào)劑 +6 | 等春來(lái)， 2026-03-04 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 085601 材料305分求助 +4 | 泡泡郵件 2026-03-03 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 347分電子信息專碩求調(diào)劑 +3 | 咕嘟咕嘟1 2026-03-03 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑 +4 | G212 2026-03-03 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 理學(xué)，工學(xué)，農(nóng)學(xué)調(diào)劑，少走彎路，這里歡迎您！ +8 | likeihood 2026-03-02 | 11/550 |
|
|
|
[碩博家園] 2025屆雙非化工碩士畢業(yè)，申博 +4 | 更多的是 2026-02-27 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿東北大學(xué)化學(xué)314分求調(diào)劑 +5 | lr1212.. 2026-03-02 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 化工京區(qū)271求調(diào)劑 +7 | 11ing 2026-03-02 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 290分材料工程085601求調(diào)劑 數(shù)二英一 +8 | llx0610 2026-03-02 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +11 | yunziaaaaa 2026-03-01 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 0856求調(diào)劑285 +11 | 呂仔龍 2026-02-28 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 材料284求調(diào)劑，一志愿鄭州大學(xué)英一數(shù)二專碩 +15 | 想上岸的土撥鼠 2026-02-28 | 15/750 |
|
|
|
[基金申請(qǐng)] 成果系統(tǒng)訪問(wèn)量大，請(qǐng)一小時(shí)后再嘗試。---NSFC啥時(shí)候好哦，已經(jīng)兩天這樣了 +4 | NSFC2026我來(lái)了 2026-02-28 | 4/200 |
|