 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 2/1 | 返回列表 |
| 查看: 5087 | 回復(fù): 12 | ||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | ||
supergrape金蟲 (小有名氣)
|
[求助]
關(guān)于使用自殺質(zhì)粒pK18SacB進(jìn)行敲除受體菌基因組上的相關(guān)片段 已有2人參與
|
|
| RT，我在前期將pK18SacB進(jìn)行改造，把卡那霉素基因替換為氯霉素（受體菌帶有卡那霉素抗性），左右同源臂的長(zhǎng)度大小是在500bp左右，構(gòu)建好的自殺載體pK18SacB是利用大腸桿菌S17進(jìn)行接合轉(zhuǎn)移，將濾膜上的菌體洗脫后涂到含有卡那霉素和氯霉素的培養(yǎng)基上。雙抗板上確實(shí)長(zhǎng)出疑似單交換的菌株（受體菌是假單胞菌，菌落形態(tài)與大腸桿菌不一樣，很容易分辨），同時(shí)涂到雙抗板上的受體菌沒有長(zhǎng)。問題是，當(dāng)我用左同源臂的上游引物+右同源臂的下游引物進(jìn)行菌落PCR驗(yàn)證，結(jié)果只有一左同源臂+右同源臂的目的條帶，沒有左同源臂+敲除片段+右同源臂的目的條帶（PCR延伸時(shí)間是按照左同源臂+敲除片段+右同源臂的長(zhǎng)度進(jìn)行設(shè)置的）。隨后，我設(shè)計(jì)了基因組上左同源臂的上游引物+自殺質(zhì)粒中右同源臂下游引物進(jìn)行pcr，結(jié)果沒有相關(guān)目的條帶（PCR延伸時(shí)間是按照左同源臂+敲除片段+右同源臂+300 bp的長(zhǎng)度進(jìn)行設(shè)置的）。懇請(qǐng)大佬解釋一下，雙抗板上的菌株是單交換的菌株嗎？ |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有100人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
|
我的理解就是單交換篩選出來的菌里面，質(zhì)粒和細(xì)菌共用一段核酸（左右同源臂），這個(gè)時(shí)候陽(yáng)性首先得是我們的目的菌株，其次還要有質(zhì)粒，所以要加雙抗。（滿足這種條件的除了發(fā)生同源重組的，還有質(zhì)粒轉(zhuǎn)進(jìn)細(xì)菌的可能，這種情況下就要重新做結(jié)合轉(zhuǎn)移了）。雙交換的時(shí)候，蔗糖使質(zhì)粒停止復(fù)制，所以最終得到的只有我們的目的菌株。 培養(yǎng)含有質(zhì)粒的大腸都會(huì)加相應(yīng)的抗生素，是一樣的道理。 |
supergrape11樓2020-01-06 18:58:13
2樓2020-01-01 21:13:28
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ...
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
supergrape: 金幣+100, ★有幫助 2020-01-12 20:21:20
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
supergrape: 金幣+100, ★有幫助 2020-01-12 20:21:20
| 左同源臂的上游引物+右同源臂的下游引物 PCR 產(chǎn)物送測(cè)序，如果是你設(shè)計(jì)的同源臂，那應(yīng)該是成功的 |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
3樓2020-01-02 19:54:08
supergrape
金蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 829
- 帖子: 88
- 在線: 21.4小時(shí)
- 蟲號(hào): 4212283
- 注冊(cè): 2015-11-11
- 專業(yè): 微生物遺傳育種學(xué)
4樓2020-01-02 23:05:54
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 080500材料科學(xué)與工程 +13 | 202114020319 2026-03-03 | 13/650 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 083000，總分284，求調(diào)劑 +3 | 徐yr 2026-03-04 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 085600，一志愿鄭州大學(xué)，280分求調(diào)劑 +5 | Wuqi725 2026-03-05 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 江西師范大學(xué)王昆-盧章輝課題組招化學(xué)方向碩士研究生兩名 +3 | 哈哈大俠 2026-02-28 | 3/150 |
|
|
[考研] 化學(xué)專業(yè)調(diào)劑 +3 | 好好好1233 2026-03-04 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料328求調(diào)劑 +10 | 一個(gè)蘿卜02 2026-03-03 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 320材料一志愿西工大專碩英二數(shù)二 有兩年光伏工作經(jīng)驗(yàn) +5 | 錘某人 2026-03-04 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 環(huán)境調(diào)劑 +7 | 柒槿levana 2026-03-01 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +4 | 熬夜的貓頭鷹 2026-03-02 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 武理材料工程302調(diào)劑 +3 | Doleres 2026-03-03 | 6/300 |
|
|
|
[論文投稿]
EST拒稿重投
 5+3
|
15102603076 2026-03-02 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 298求調(diào)劑一志愿中海洋 +3 | lour. 2026-03-03 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 268求調(diào)劑 +10 | 簡(jiǎn)單點(diǎn)0 2026-03-02 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 278求調(diào)劑 +3 | 滿天星11_22 2026-03-02 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 26考研報(bào)考西工大材料308分求調(diào)劑 +4 | weizhong123 2026-03-01 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +11 | yunziaaaaa 2026-03-01 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 0856材料調(diào)劑 +5 | 沿岸有貝殼OUC 2026-03-02 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿東北大學(xué)材料專碩328，求調(diào)劑 +3 | shs1083 2026-03-02 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0856化工專碩求調(diào)劑 +15 | 董boxing 2026-03-01 | 15/750 |
|
|
|
[基金申請(qǐng)] 此成果不能導(dǎo)入原因：元數(shù)據(jù)必填信息不完整，可 進(jìn)行補(bǔ)充。 +4 | Kittylucky 2026-03-02 | 5/250 |
|