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雙酶切求助! 已有2人參與
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雙酶切后載體條帶很淺 實驗內(nèi)容是載體和插入片段同時酶切過夜,用的EcoRI和BamHI,片段和載體都是50體系,且都加了500ng,試過把載體加到1000ng,跑出來的條帶是插入片段是亮的,載體條帶很淺,幾乎看不見,測了濃度是載體酶切后在1-2ng/ul,反復酶切過幾次都是這種結果,片段是1500bp,載體是改造載體1.6kb求大佬解答! 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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我也有過懷疑是否是酶切時間過長,同時也懷疑是否產(chǎn)生星號活性,昨晚換了ecroi的buffer,同樣也未改善多少,接下來試一下縮短酶切時間吧,那我大概酶切多長時間呢,用的是賽默飛的酶,推薦時間是1-16小時 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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其實我后面已經(jīng)重轉過了,結果也是差不多,就是感覺載體有問題,但不知道問題在哪兒,后續(xù)用酶切產(chǎn)物直接回收,沒有跑膠,得到過7-8ng/ul的濃度做了轉化,但沒有得到陽性菌 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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