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Sily2020新蟲 (小有名氣)
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求助帖：質(zhì)粒提取搖菌失敗求助 已有1人參與
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新手第一次做質(zhì)粒轉(zhuǎn)化，挑菌、提取，做的是PNL-4-3這個(gè)質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化使用熱激法，質(zhì)粒+感受態(tài)細(xì)胞stbl3結(jié)合冰浴30min,熱激90s，在冰浴2min，加1ml的無(wú)抗LB培養(yǎng)基，搖1h，取10ml菌液鋪固體培養(yǎng)基，雖然長(zhǎng)菌挺密，但可挑出單菌落，然后10ml有抗培養(yǎng)基搖菌，搖了20管，過(guò)夜搖菌，渾濁了，然后用天根大抽提試劑盒，富集了將近200ml的菌體，嚴(yán)格按照說(shuō)明書做，但最后提取出的質(zhì)粒濃度不到50ng/ul，純度OD260/280大于2，為什么呢？希望各位蟲友解答一下，感謝 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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挑斑可以直接加到錐形瓶里搖培，過(guò)夜能搖渾。你說(shuō)的先用試管活化一下，試管太細(xì)，加的LB不宜太多，2-3-4毫升這個(gè)水平，白天搖幾個(gè)小時(shí)微渾，然后1：500 1：1000加到錐形瓶里過(guò)夜都行，只要方法對(duì)了，都能做出來(lái)。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
9樓2021-01-23 18:33:22
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2樓2021-01-22 11:29:26
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挑克隆后先用5毫升搖菌，保種一毫升。剩下的四毫升提取質(zhì)粒電泳鑒定。不要一來(lái)就大抽。小的證明沒問(wèn)題再大抽。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
3樓2021-01-22 13:07:47
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4樓2021-01-22 13:08:51
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